公开(公告)号：CN102127533A

公开(公告)日：2011-07-20

申请号：CN201010618223.6

申请日：2010-12-31

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  刘娜 ,  吴锋 ,  刘德辉

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/33 ,  C12P21/02 ,  A61K39/12 ,  A61P31/12 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法，是采用酵母表达系统，先扩增PCV2-ORF2基因，然后构建表达工程菌，即将扩增序列插入酵母表达载体，形成重组表达载体，线性化后转化毕赤酵母宿主细胞，构建表达工程菌，最后重组酵母菌分泌表达，得到重组猪圆环病毒2型Cap抗原蛋白。酵母表达系统对表达的蛋白有加工折叠和翻译后修饰的功能，从而使表达的蛋白具有生物活性，比起大肠杆菌更有优势，但比哺乳动物细胞表达系统操作更简便。而与酿酒酵母相比，毕赤酵母不易过度糖基化，因此分离纯化步骤简单。采用酵母表达系统操作简单、表达量较高，生产成本低，可以进行大规模生产，有利于猪圆环病毒亚单位疫苗的推广使用。

公开(公告)号：CN101870986A

公开(公告)日：2010-10-27

申请号：CN201010181259.2

申请日：2010-05-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  刘德辉 ,  何俊

IPC: C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C07K14/47 ,  A61K38/16 ,  A61P31/04 ,  A23K1/16 ,  A23L3/3526

Abstract: 本发明公开了一种抗菌肽plectasin的高效生产方法及应用，通过构建pGAPZαA-plectasin真核表达载体转化宿主细胞毕赤酵母，构建表达工程菌，发酵培养表达工程菌后将表达培养基离心处理得到上清液即为纯化得到抗菌肽plectasin。所述抗菌肽plectasin可应用于制备抗菌药物或饲料添加剂或防腐剂，对金黄色葡萄球菌或猪源链球菌具有良好的抗性作用。本发明操作简单，成本较低。

公开(公告)号：CN102319440B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110239759.1

申请日：2011-08-19

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  郭春和 ,  刘德辉

IPC: A61K48/00 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明公开了一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法。本发明所述方法首先是构建重组酵母表达载体pGAPZαA-VP2，然后电击转化巴斯德毕赤酵母菌株SMD1168，使VP2蛋白在YPD培养基中高效分泌表达，形成不含病毒核酸的病毒样颗粒，然后纯化蛋白，经SDS-PAGE和WesternBlot及电镜检测，加相应的免疫佐剂即制成了猪细小病毒基因工程疫苗。本发明所述方法制得的猪细小病毒基因工程疫苗解决了当前猪细小病毒传统疫苗存在的缺陷，可用于预防和治疗猪细小病毒感染及其引起的相关疾病，也同样适用于制备检测猪细小病毒抗体ELISA试剂盒的包被抗原。

公开(公告)号：CN102127533B

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201010618223.6

申请日：2010-12-31

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  刘娜 ,  吴锋 ,  刘德辉

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/33 ,  C12P21/02 ,  A61K39/12 ,  A61P31/12 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法，是采用酵母表达系统，先扩增PCV2-ORF2基因，然后构建表达工程菌，即将扩增序列插入酵母表达载体，形成重组表达载体，线性化后转化毕赤酵母宿主细胞，构建表达工程菌，最后重组酵母菌分泌表达，得到重组猪圆环病毒2型Cap抗原蛋白。酵母表达系统对表达的蛋白有加工折叠和翻译后修饰的功能，从而使表达的蛋白具有生物活性，比起大肠杆菌更有优势，但比哺乳动物细胞表达系统操作更简便。而与酿酒酵母相比，毕赤酵母不易过度糖基化，因此分离纯化步骤简单。采用酵母表达系统操作简单、表达量较高，生产成本低，可以进行大规模生产，有利于猪圆环病毒亚单位疫苗的推广使用。

公开(公告)号：CN102319440A

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201110239759.1

申请日：2011-08-19

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  郭春和 ,  刘德辉

IPC: A61K48/00 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明公开了一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法。本发明所述方法首先是构建重组酵母表达载体pGAPZαA-VP2，然后电击转化巴斯德毕赤酵母菌株SMD1168，使VP2蛋白在YPD培养基中高效分泌表达，形成不含病毒核酸的病毒样颗粒，然后纯化蛋白，经SDS-PAGE和WesternBlot及电镜检测，加相应的免疫佐剂即制成了猪细小病毒基因工程疫苗。本发明所述方法制得的猪细小病毒基因工程疫苗解决了当前猪细小病毒传统疫苗存在的缺陷，可用于预防和治疗猪细小病毒感染及其引起的相关疾病，也同样适用于制备检测猪细小病毒抗体ELISA试剂盒的包被抗原。

公开(公告)号：CN102229934A

公开(公告)日：2011-11-02

申请号：CN201110158765.4

申请日：2011-06-14

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黄毓茂 ,  何俊 ,  刘德辉

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C07K14/47 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种猪小肠抗菌肽PR-39在毕赤酵母中的高效生产方法及应用。本发明根据毕赤酵母的偏嗜性合成编码PR-39的DNA序列，连接表达载体pGAPZαA，构建pGAPZαA-PR-39真核表达载体；转化重组表达载体至宿主细胞，构建表达工程菌；发酵培养重组酵母菌，进行表达。本发明应用基因工程技术在毕赤酵母宿主细胞中高效表达了抗菌肽PR-39，表达效率高，分离纯化简单，生产成本低，易放大，稳定性好，适于大规模工业化生产，在制备抗菌药物、饲料添加剂或食品防腐剂方面具有广阔的应用前景。