一种基于CRISPR-Cas12a系统的噬菌体基因组编辑载体及其应用

    公开(公告)号:CN111926030B

    公开(公告)日:2021-10-15

    申请号:CN202010670227.2

    申请日:2020-07-13

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a系统的噬菌体基因组编辑载体,该载体包含由proC启动子调控的LbCas12a蛋白编码框核酸序列、J23100启动子调控的crRNA表达框核酸序列、包含大肠杆菌复制因子CloDF13、壮观霉素耐受基因SMR和负责调控LbCas12a蛋白表达的proC启动子元件的质粒骨架核酸序列。本发明还公开了该载体的构建方法及其在噬菌体基因组编辑中的应用。很多噬菌体通过对自身基因组DNA进行共价化学修饰(如T4噬菌体基因组中的胞嘧啶被高度糖基化修饰)以耐受宿主核酸酶对其基因组的切割,噬菌体的这种自我保护机制给基因组编辑带来了很大障碍,本发明克服了噬菌体基因组共价修饰的限制,实现了对噬菌体基因组的高效编辑。

    融合蛋白LSDV090-133及其在检测牛结节性皮肤病病毒抗体中的应用

    公开(公告)号:CN117683142A

    公开(公告)日:2024-03-12

    申请号:CN202311665648.6

    申请日:2023-12-06

    Abstract: 本发明属于分子生物学领域,公开了融合蛋白LSDV090‑133及其在检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染抗体和鉴别疫苗免疫抗体中的应用。本发明利用噬菌体展示文库筛选针对牛结节性皮肤病病毒感染血清和山羊痘弱毒疫苗免疫血清的特异性多肽,经生物信息学分析,选取牛结节性皮肤病病毒感染血清特有的3条多肽,通过柔性肽串联至pET28a载体,送公司进行基因合成,原核表达得到LSDV090‑133融合蛋白,分子量约为20 kDa。经验证,该蛋白与LSDV感染牛阳性血清有很强的反应原性,其灰度值明显强于与山羊痘弱毒疫苗免疫60dpi后的免疫血清,是一种潜在的鉴别诊断新靶标,能用于鉴别诊断LSDV感染和山羊痘弱毒疫苗免疫的抗体反应,为牛结节性皮肤病的血清学诊断和防控提供参考工具。

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