公开(公告)号：CN101011027A

公开(公告)日：2007-08-08

申请号：CN200710063650.0

申请日：2007-02-07

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张献龙 ,  金双侠 ,  聂以春 ,  郭小平 ,  朱华国

IPC: A01H1/06 ,  A01H4/00 ,  C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N15/87

CPC classification number: Y02A40/162

Abstract: 本发明属于棉花转基因技术领域，公开了超声波辅助农杆菌转化棉花胚芽的培育转基因棉花的新方法。包括：将剥掉种皮消毒后棉种接种到无菌苗萌发培养基上，将刚萌发两片子叶剥离，置润湿的无菌滤纸上，将10ml 0.5 OD600nm的农杆菌菌液加入到塑料离心管或玻璃小三角瓶中并将剥好的胚芽加到农杆菌液中，将离心管或者小三角瓶放在超声波清洗器中的中央，用100－150W的超声波处理1－5min，将处理过的胚芽转移至共培养培养基培养，再用含头孢霉素的无菌水冲洗，吸干胚芽表面水分，转移至恢复培养基上，在光照下恢复培养得到幼芽，将其转到选择培养基继代，得到抗性芽，将其切下转移至生根培养基上诱导生根或嫁接在棉花砧木上，得到再生转基因植株。本发明将GFP(绿色荧光蛋白)基因在胚芽的瞬时表达率提高100多倍；首次实现了海岛棉(长绒棉)的转基因植株；获得了一批转抗虫基因的棉花植株。分子及田间实验检测表明，外源基因已经稳定转入到受体棉花基因组中并能稳定表达和遗传。

公开(公告)号：CN101011027B

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN200710063650.0

申请日：2007-02-07

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张献龙 ,  金双侠 ,  聂以春 ,  郭小平 ,  朱华国

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/87 ,  C12N5/04 ,  A01H4/00

CPC classification number: Y02A40/162

Abstract: 本发明属于棉花转基因技术领域，公开了超声波辅助农杆菌转化棉花胚芽的培育转基因棉花的新方法。包括：将剥掉种皮消毒后棉种接种到无菌苗萌发培养基上，将刚萌发两片子叶剥离，置润湿的无菌滤纸上，将10ml 0.5 OD600nm的农杆菌菌液加入到塑料离心管或玻璃小三角瓶中并将剥好的胚芽加到农杆菌液中，将离心管或者小三角瓶放在超声波清洗器中的中央，用100-150W的超声波处理1-5min，将处理过的胚芽转移至共培养培养基培养，再用含头孢霉素的无菌水冲洗，吸干胚芽表面水分，转移至恢复培养基上，在光照下恢复培养得到幼芽，将其转到选择培养基继代，得到抗性芽，将其切下转移至生根培养基上诱导生根或嫁接在棉花砧木上，得到再生转基因植株。本发明将GFP(绿色荧光蛋白)基因在胚芽的瞬时表达率提高100多倍；首次实现了海岛棉(长绒棉)的转基因植株；获得了一批转抗虫基因的棉花植株。分子及田间实验检测表明，外源基因已经稳定转入到受体棉花基因组中并能稳定表达和遗传。