公开(公告)号：CN1807618A

公开(公告)日：2006-07-26

申请号：CN200610018256.0

申请日：2006-01-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘子铎 ,  张炼辉 ,  洪玉枝 ,  喻子牛

IPC: C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种AT选择性高频率诱变方法。其步骤包括以dUTP为媒介进行第一轮PCR扩增，得到含dUMP的杂合DNA分子；以该DNA分子为模板，进行第二轮PCR扩增；通过部分U与G配对，获得AT碱基分别被GC替换的突变DNA分子或者在第一轮PCR扩增后，以含有dUMP的杂合DNA分子为模板，在0.5mM Mgcl2存在下进行在第二轮PCR扩增，获得高突变频率的DNA分子。本发明的AT选择性诱变方法突变频率为0.86％.其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基数的96.5％；高频率诱变方法的突变率为 4.0％。其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基的90.4％。本发明的方法可用于DNA分子的体外改良。

公开(公告)号：CN101096659A

公开(公告)日：2008-01-02

申请号：CN200610019483.5

申请日：2006-06-28

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘子铎 ,  洪玉枝 ,  张炼辉 ,  喻子牛

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域。公开了一种低保真Taq DNA聚合酶突变体，其保真度比野生型低18倍，且具有能使AT转换为GC的特性。本发明提供了获得该低保真DNA聚合酶突变体的方法；含有该低保真DNA聚合酶突变体基因的重组质粒以及利用该DNA聚合酶突变体建立的能使碱基AT转换为GC的诱变方法。

公开(公告)号：CN1807618B

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200610018256.0

申请日：2006-01-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘子铎 ,  张炼辉 ,  洪玉枝 ,  喻子牛

IPC: C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种AT选择性高频率诱变方法。其步骤包括以dUTP为媒介进行第一轮PCR扩增，得到含dUMP的杂合DNA分子；以该DNA分子为模板，进行第二轮PCR扩增；通过部分U与G配对，获得AT碱基分别被GC替换的突变DNA分子或者在第一轮PCR扩增后，以含有dUMP的杂合DNA分子为模板，在0.5mM Mgcl2存在下进行在第二轮PCR扩增，获得高突变频率的DNA分子。本发明的AT选择性诱变方法突变频率为0.86％.其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基数的96.5％；高频率诱变方法的突变率为4.0％。其中AT转换为其它碱基数占总突变碱基的90.4％。本发明的方法可用于DNA分子的体外改良。