公开(公告)号：CN103421904B

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201310353402.5

申请日：2013-08-14

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 栗绍文 ,  张超 ,  孟宪荣 ,  蔡旭旺 ,  潘秀华

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 发明名称：一种单核细胞增生李斯特菌LAMP可视化检测方法本发明属于食源性病原菌分子检测技术领域，具体涉及一种基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因的LAMP可视化检测方法。反应体系包括针对靶基因prfA的4条特异性引物、LAMP检测的反应体系、显色溶剂和反应覆盖液。60℃温育50min，80℃5min后终止反应，电泳后阳性扩增产物为不同大小区带组成的阶梯式图谱。扩增产物中加入显色溶剂，肉眼观察结果，天蓝色为阳性，紫罗兰色为阴性。本发明特异性强，操作简单，结果易于观察，可用于基层单位对于临床样品中单核细胞增生李斯特菌的初步筛选和快速检测。

公开(公告)号：CN103421904A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201310353402.5

申请日：2013-08-14

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 栗绍文 ,  张超 ,  孟宪荣 ,  蔡旭旺 ,  潘秀华

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于食源性病原菌分子检测技术领域，具体涉及一种基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因的LAMP可视化检测方法。反应体系包括针对靶基因prfA的4条特异性引物、LAMP检测的反应体系、显色溶剂和反应覆盖液。60℃温育50min，80℃5min后终止反应，电泳后阳性扩增产物为不同大小区带组成的阶梯式图谱。扩增产物中加入显色溶剂，肉眼观察结果，天蓝色为阳性，紫罗兰色为阴性。本发明特异性强，操作简单，结果易于观察，可用于基层单位对于临床样品中单核细胞增生李斯特菌的初步筛选和快速检测。

公开(公告)号：CN109172817B

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN201810936969.8

申请日：2018-08-16

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 何启盖 ,  张程光 ,  陈芳洲 ,  吴美洲 ,  范盛先 ,  何东贤 ,  李中华 ,  孟宪荣

IPC: A61K39/215 ,  A61K9/50 ,  A61K47/36 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球的制备方法及其应用，该方法将猪流行性腹泻病毒弱毒株PEDV‑YN144培养，过滤得到病毒滤液；向病毒滤液中碳酸氢钠溶液，在磁力搅拌条件下缓慢滴加壳聚糖溶液；再缓慢滴加三聚磷酸钠溶液；搅拌得到混合液；将明胶与混合液混匀，冷冻干燥即得到猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球。本发明所使用的包裹工艺过程不添加有机试剂，保留了抗原活性，制备过程简单、省时，且易于储存运输。本发明的猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球能增强疫苗的免疫效果，延长疫苗的作用时间。

公开(公告)号：CN109762807A

公开(公告)日：2019-05-17

申请号：CN201910157397.8

申请日：2019-03-01

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 栗绍文 ,  孙梦真 ,  孟宪荣 ,  王雪

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明属于肉类产品分析检测领域，具体涉及一种肉类中细菌DNA提取的试剂盒及应用方法。本发明制备的试剂盒可用于肉类样品不增菌的条件下对细菌基因组DNA进行提取，试剂盒的核心试剂和吸附载体，包括裂解液A，结合液B，清洗液C，洗脱液D，蛋白酶K和优化后的氨基磁珠。应用方法包括：先将肉类样品中的细菌洗涤下来，以不同速率进行离心；取沉淀加入裂解液A，蛋白酶K，孵育；离心后取上清加入优化的氨基磁珠与等量结合液B振荡混匀，磁性分离，用清洗液C清洗并干燥，加洗脱液D进行洗脱，得到肉类中细菌DNA。本发明可快速从肉类样品中提取细菌DNA，无需增菌培养。提取到的细菌DNA可用于PCR扩增或LAMP检测。

公开(公告)号：CN109172817A

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201810936969.8

申请日：2018-08-16

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 何启盖 ,  张程光 ,  陈芳洲 ,  吴美洲 ,  范盛先 ,  何东贤 ,  李中华 ,  孟宪荣

IPC: A61K39/215 ,  A61K9/50 ,  A61K47/36 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球的制备方法及其应用，该方法将猪流行性腹泻病毒弱毒株PEDV-YN144培养，过滤得到病毒滤液；向病毒滤液中碳酸氢钠溶液，在磁力搅拌条件下缓慢滴加壳聚糖溶液；再缓慢滴加三聚磷酸钠溶液；搅拌得到混合液；将明胶与混合液混匀，冷冻干燥即得到猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球。本发明所使用的包裹工艺过程不添加有机试剂，保留了抗原活性，制备过程简单、省时，且易于储存运输。本发明的猪流行性腹泻病毒减毒活疫苗壳聚糖微球能增强疫苗的免疫效果，延长疫苗的作用时间。

公开(公告)号：CN109161612A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201810922394.4

申请日：2018-08-14

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 何启盖 ,  何东贤 ,  陈芳洲 ,  吴美洲 ,  范盛先 ,  张程光 ,  李中华 ,  孟宪荣

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种鉴定猪流行性腹泻病毒变异弱毒株YN144的酶切位点及其方法。所述酶切位点为ACACGT。该方法首先获取待测目标样品并反转录成cDNA，以所获得的cDNA为模板加入引物对进行RT-PCR扩增，扩增得到PCR产物后用琼脂糖凝胶电泳法分析，确定是否为猪流行性腹泻病毒变异毒株；当待测目标样品为猪流行性腹泻病毒变异毒株时，使用AflIII酶对PCR产物进行酶切，确定变异毒株是否为猪流行性腹泻病毒变异弱毒株YN144。本发明的RT-PCR检测敏感度可达到1×100.7TCID50/100μL病毒量或1.27×103copies/μL质粒量；该RT-PCR方法结合酶切方法，鉴别变异毒株和变异弱毒株YN144。