公开(公告)号：CN117487837A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202210920575.X

申请日：2022-08-02

Applicant: 华东理工大学

Inventor： 花强 ,  郭思妤 ,  李娟 ,  孙雪媛 ,  刘枫 ,  冯世昌 ,  胡凤仙 ,  陈骏

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种适用于珍贵束丝放线菌的基因编辑质粒，所述基因编辑质粒以CRISPR‑Cas9质粒工具的骨架为基础，通过根据珍贵束丝放线菌(A.pretiosum)的偏好，将Cas9蛋白编码序列cas9核酸序列的密码子优化；将优化后的Cas9蛋白编码序列亚克隆到CRISPR‑Cas9质粒工具的骨架上；以pIJ101复制子取代质粒骨架上原有的温敏型复制子pSG5；以及在sgRNA启动子ermEp*下游插入限制性内切酶XmaJI的酶切位点而实现。本发明还公开了所述基因编辑质粒用于改造珍贵束丝放线菌以提高安丝菌素P‑3的产量的应用。本发明的基因编辑质粒实现了基因组规模的基因多次迭代编辑，为关于珍贵束丝放线菌(A.pretiosum)的新代谢产物的挖掘、底盘菌株的设计、代谢途径工程改造与代谢调控机制等方面的研究提供了操作性更高的工具。