公开(公告)号：CN116445442A

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202310024443.3

申请日：2023-01-07

Applicant: 北京理工大学

Inventor： 冯旭东 ,  简行 ,  李春 ,  孙秋艳 ,  徐文涛

IPC: C12N9/10 ,  C12P19/46

Abstract: 本发明涉及一种人工计算的UDP‑糖基转移酶UGT91H_A1基因及其编码的蛋白。本发明通过对UDP‑糖基转移酶UGT91H亚家族进行祖先酶序列重构，计算获得一种新型UDP‑糖基转移酶的基因UGT91H_A1及其编码的蛋白，在大肠杆菌细胞中成功异源表达，并验证其催化合成常春藤苷元3‑O‑α‑L‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑L‑阿拉伯糖、常春藤苷元3‑O‑β‑D木糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑L‑阿拉伯糖、常春藤苷元3‑O‑β‑D‑葡萄糖基(1‑2)‑α‑L‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑L‑阿拉伯糖的功能，同时偶联蔗糖合酶GuSUS1‑Δ9、UDP‑Rha合酶AtRHM2、双功能鼠李糖合酶AtNRS/ER和UDP‑糖基转移酶UGT91H_A1构建UDP‑Rha循环再生系统，该系统可催化α‑常春藤苷糖苷化合物合成。本发明填补了五环三萜α‑常春藤苷C‑3母核上2"‑OH糖基化研究方面的空白，为后续合成具有潜在临床价值的新型α‑常春藤苷糖苷化合物的相关研究提供了参考和依据，同时构建的UDP‑Rha循环再生体系也极大降低了常春藤苷元3‑O‑α‑L‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑l‑鼠李糖基(1‑2)‑α‑l‑阿拉伯糖的制备成本。