公开(公告)号：CN102776232A

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201110119728.2

申请日：2011-05-10

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 韩烈保 ,  代小梅 ,  孙鑫博 ,  王怡杰

IPC: C12N15/84

Abstract: 本发明提供了一种日本结缕草高效农杆菌介导转化方法，其是用悬浮于AAM-AS培养基中的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)侵染日本结缕草的愈伤组织，将侵染后的愈伤组织置于N6D2-AS培养基中共培养2-4天，最后洗去根癌农杆菌，筛选并培养愈伤组织。本发明针对农杆菌介导日本结缕草遗传转化体系影响转化效率的三大重要影响因子，摸索出最佳菌液浓度(OD600值为0.5-0.6)，侵染时间(15min)及共培养时间(2-3天)。结合培养基的改良，最终转化效率达到50％以上；另外，本发明通过改进农杆菌清洗方法，使在筛选培养的过程中排除了农杆菌的污染，与以往的农杆菌介导转化方法相比，大大减少了工作量，节约了成本，避免了愈伤材料的浪费。

公开(公告)号：CN102776231A

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201110119725.9

申请日：2011-05-10

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 韩烈保 ,  代小梅 ,  孙鑫博 ,  王怡杰

IPC: C12N15/84

Abstract: 本发明提供了一种农杆菌介导的日本结缕草遗传转化方法，其是用悬浮于AAM-AS培养基中的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)侵染日本结缕草的愈伤组织，将侵染后的愈伤组织置于N6D2-AS培养基中共培养2-3天，最后洗去根癌农杆菌，筛选并培养愈伤组织。本发明针对农杆菌介导日本结缕草遗传转化体系影响转化效率的三大重要影响因子，摸索出最佳菌液浓度(OD600值为0.3-0.4)，侵染时间(1.5-2h)及共培养时间(2-3天)。结合培养基的改良，最终转化效率达到50％以上；另外，本发明通过改进农杆菌清洗方法，使在筛选培养的过程中排除了农杆菌的污染，与以往的农杆菌介导转化方法相比，大大减少了工作量，节约了成本，避免了愈伤材料的浪费。