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公开(公告)号：CN116162731A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310336499.2
申请日：2023-03-31
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了基于锁式探针的落叶松枯梢病菌滚环扩增引物组及应用，本发明基于落叶松枯梢病菌的ITS片段序列差异，利用锁式探针能与模板DNA互补结合的特点，在落叶松枯梢病菌的特异性片段上设计出了用于检测落叶松枯梢病的特异性锁式探针，经过环化连接、外切酶消化未环化线性探针、再用扩增引物进行超分支滚环扩增，最后通过电泳验证实现落叶松枯梢病菌的检测。本发明可从真菌菌丝体中快速、准确地检测出落叶松枯梢病菌，缩短了传统落叶松枯梢病原真菌的检测时间，提高了检疫效率，同时具有特异性强、灵敏度高、操作简单、结果可靠等特点。因此，对于落叶松枯梢病的早期快速检疫及病害防控等具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118995995B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411482036.8
申请日：2024-10-23
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了基于超分支滚环扩增检测落叶松枯梢病菌的探针引物组、试剂盒及检测方法，探针引物组包括：锁式探针NL‑FD、第一滚环扩增引物NL‑F1、第二滚环扩增引物NL‑F2、以及检测探针cZip。本发明根据落叶松枯梢病菌ITS基因的保守序列作为靶标基因设计了锁式探针，建立了完整的滚环扩增体系，并将其与核酸试纸条相结合，实现可视化检测。本发明运用了超分支滚环扩增技术结合侧向流试纸条来检测落叶松枯梢病菌能够使HRCA扩增检测结果更直观快速，同时具有较高的特异性和灵敏度，最低检测限度浓度为1pg/μL，显示出其在现场检测的潜力，满足落叶松枯梢病菌在基层的准确鉴定应用。
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公开(公告)号：CN118995995A
公开(公告)日：2024-11-22
申请号：CN202411482036.8
申请日：2024-10-23
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了基于超分支滚环扩增检测落叶松枯梢病菌的探针引物组、试剂盒及检测方法，探针引物组包括：锁式探针NL‑FD、第一滚环扩增引物NL‑F1、第二滚环扩增引物NL‑F2、以及检测探针cZip。本发明根据落叶松枯梢病菌ITS基因的保守序列作为靶标基因设计了锁式探针，建立了完整的滚环扩增体系，并将其与核酸试纸条相结合，实现可视化检测。本发明运用了超分支滚环扩增技术结合侧向流试纸条来检测落叶松枯梢病菌能够使HRCA扩增检测结果更直观快速，同时具有较高的特异性和灵敏度，最低检测限度浓度为1pg/μL，显示出其在现场检测的潜力，满足落叶松枯梢病菌在基层的准确鉴定应用。
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公开(公告)号：CN116162731B
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310336499.2
申请日：2023-03-31
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了基于锁式探针的落叶松枯梢病菌滚环扩增引物组及应用，本发明基于落叶松枯梢病菌的ITS片段序列差异，利用锁式探针能与模板DNA互补结合的特点，在落叶松枯梢病菌的特异性片段上设计出了用于检测落叶松枯梢病的特异性锁式探针，经过环化连接、外切酶消化未环化线性探针、再用扩增引物进行超分支滚环扩增，最后通过电泳验证实现落叶松枯梢病菌的检测。本发明可从真菌菌丝体中快速、准确地检测出落叶松枯梢病菌，缩短了传统落叶松枯梢病原真菌的检测时间，提高了检疫效率，同时具有特异性强、灵敏度高、操作简单、结果可靠等特点。因此，对于落叶松枯梢病的早期快速检疫及病害防控等具有重要意义。
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