公开(公告)号：CN104844696A

公开(公告)日：2015-08-19

申请号：CN201410056380.0

申请日：2014-02-19

Applicant: 北京大学

Inventor： 席建忠 ,  孙常宏 ,  王干诚

IPC: C07K14/00 ,  C07K1/00 ,  G01N33/68

Abstract: 一种“转录激活子样效应因子(Transcription Activator Like Effectors，TALE)”功能蛋白，所述“转录激活子样效应因子”功能蛋白的重复可变的双氨基酸残基RVD(repeat variable di-residues)分别为精氨酸R和缬氨酸V、或者分别为缬氨酸V和异亮氨酸I、或者分别为甘氨酸G和天冬氨酸D、或者分别为精氨酸R和色氨酸W、或者分别为苏氨酸T和甘氨酸G、或者分别为半胱氨酸C和甘氨酸G、或者分别为谷氨酸E和半胱氨酸C。

公开(公告)号：CN108424907B

公开(公告)日：2021-10-15

申请号：CN201810436798.2

申请日：2018-05-09

Applicant: 北京大学

Inventor： 席建忠 ,  朱丹 ,  王干诚

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种高通量DNA多位点精确碱基突变方法。本发明所提供的方法是基于重叠延伸PCR高通量对目标基因片段多位点高效引入突变的方法；所用引物不是简并引物，而是准确设计目标突变序列的突变引物；突变位点长度不限于单个氨基酸，可设计为连续1‑5个氨基酸；引物非单条分开合成，而是由寡核苷酸合成仪在集成芯片上批量合成，引物种类量级可达104‑105种类/批次；本发明所述突变方法可通过调节反应条件在一定程度上实现对突变频率的控制。本发明的突变建库方法可获得较高比例的有效突变体，建库突变体阳性率(非同义氨基酸突变)可达～80％；本发明所建的突变体库经过后续高通量筛选成为获得理想蛋白质及核酸改造体的有力工具。

公开(公告)号：CN108424907A

公开(公告)日：2018-08-21

申请号：CN201810436798.2

申请日：2018-05-09

Applicant: 北京大学

Inventor： 席建忠 ,  朱丹 ,  王干诚

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种高通量DNA多位点精确碱基突变方法。本发明所提供的方法是基于重叠延伸PCR高通量对目标基因片段多位点高效引入突变的方法；所用引物不是简并引物，而是准确设计目标突变序列的突变引物；突变位点长度不限于单个氨基酸，可设计为连续1-5个氨基酸；引物非单条分开合成，而是由寡核苷酸合成仪在集成芯片上批量合成，引物种类量级可达104-105种类/批次；本发明所述突变方法可通过调节反应条件在一定程度上实现对突变频率的控制。本发明的突变建库方法可获得较高比例的有效突变体，建库突变体阳性率(非同义氨基酸突变)可达～80％；本发明所建的突变体库经过后续高通量筛选成为获得理想蛋白质及核酸改造体的有力工具。