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公开(公告)号：CN104774801A
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201510173632.2
申请日：2015-04-14
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种核酸核糖体结合体系构建方法及应用。所述的核酸核糖体结合体系构建方法是在经0.1%DEPC处理过的500μl的离心小管中于0~5℃加入12μl核糖体麦胚抽提溶液，再依次加入1ul RNAsin(40U/ul，Takara)，2ul含100mM KAC,4mM Mg(AC)2,20mM Hepes, 20mM DTT的溶液，1ul 1mM/each 20种氨基酸标准混合液（promega），2.5ul 10mM ATP,1ul 10mM GTP,0.5ul 2mM 放线菌酮，1.5ul 8mM磷酸肌酸, 1ug TMV-RNA,0.5ul磷酸肌酸激酶，用DEPC处理水补至25μl，离心后置于23~26℃下14~16min，然后转置于0~5℃条件下得到核酸-核糖体结合体系。应用为所述的核酸核糖体结合体系构建方法用于研究药物筛选的应用。本发明构建的核酸核糖体结合体系可应用于病毒核酸-核糖体结合抑制的药物筛选研究。
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公开(公告)号：CN104745524A
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201510173987.1
申请日：2015-04-14
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种植物核糖体的制备方法，包括麦胚的制备、核糖体麦胚抽提物的制备步骤，具体包括：取小麦种子，干燥粉碎过筛，收集麦粉颗粒，悬浮，挑选，洗涤，裂解，超声处理，震摇处理，干燥，置于离心管中，抽提，洗脱，纯化处理，作洗脱曲线，核酸琼脂电泳，鉴定洗脱液，确定含核糖体的麦胚抽提物并收集，得到目标物，置液氮中保存备用。本发明解决了核酸核糖体离体结合体系的构建及药物的抗病毒活性筛选中材料的来源与质量，本发明制备得到的植物核糖体质量纯净，纯度较高且提取完整，可用于病毒TMV-RNA离体蛋白翻译体系，用于靶向性药物筛选,作为核糖体的一个来源。
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公开(公告)号：CN104726617A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510174302.5
申请日：2015-04-14
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q1/701 , C12Q2531/113 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开了一种实时荧光定量PCR检测病毒核酸的方法，包括RNA提取、PCR反应、检测步骤，具体包括：提取感病烟草总RNA，提纯TMV-RNA反转录得到第一链cDNA；根据Gen bank数据库，以TMV外壳蛋白基因系列作为病毒核酸检测的指标，设计合成特异引物，以cDNA为作为模板，进行PCR扩增，回收和纯化PCR产物；对回收和纯化的PCR产物进行实时荧光定量PCR检测。本发明可直接应用于体系构建，进行体系中病毒核酸的定量检测，检测结果具有可靠性。同时也显示出采用实时荧光定量PCR技术通过扩增循环的Ct值变化来进行天然物抗病毒药理和活性筛选的良好前景。
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公开(公告)号：CN104745524B
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201510173987.1
申请日：2015-04-14
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种植物核糖体的制备方法，包括麦胚的制备、核糖体麦胚抽提物的制备步骤，具体包括：取小麦种子，干燥粉碎过筛，收集麦粉颗粒，悬浮，挑选，洗涤，裂解，超声处理，震摇处理，干燥，置于离心管中，抽提，洗脱，纯化处理，作洗脱曲线，核酸琼脂电泳，鉴定洗脱液，确定含核糖体的麦胚抽提物并收集，得到目标物，置液氮中保存备用。本发明解决了核酸核糖体离体结合体系的构建及药物的抗病毒活性筛选中材料的来源与质量，本发明制备得到的植物核糖体质量纯净，纯度较高且提取完整，可用于病毒TMV‑RNA离体蛋白翻译体系，用于靶向性药物筛选,作为核糖体的一个来源。
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