公开(公告)号：CN116515957A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202210069206.4

申请日：2022-01-21

Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所

Inventor： 韩坤 ,  鞠婷 ,  翟星帏 ,  吴雪兰 ,  李靖雯

IPC: C12Q1/6816

Abstract: 本发明公开了一种基于基因编辑和流式分析技术的核酸检测试剂，其包括CRISPR‑Cas蛋白、crRNA、引发剂、磁珠和探针发夹核酸。采用该试剂进行核酸检测的方法为：先将待检测样品、CRISPR‑Cas12a蛋白、crRNA、引发剂混合，孵育；再加入磁珠反应，反应后分离取出磁珠，洗涤后再与修饰有标记物的发夹核酸混合，孵育；最后将反应后的磁珠分离取出，洗涤后通过流式细胞术检测荧光强度，再计算出待检测样品中的待检测的核酸靶标的浓度。本发明还构建了基于该试剂的快速检测DNA的方法，可在短时间内高效识别靶标，具有高特异性、高灵敏度等优点，检测限低至2pM，有望成为生物医学研究和临床诊断的有力检测手段。

公开(公告)号：CN116497090A

公开(公告)日：2023-07-28

申请号：CN202310330621.5

申请日：2023-03-30

Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所

Inventor： 韩坤 ,  鞠婷 ,  吴雪兰 ,  翟星帏 ,  李靖雯

IPC: C12Q1/6818

Abstract: 本发明涉及一种核酸检测试剂盒及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明提供了一种基于CRISPR/Cas12a、HCR和FRET的核酸检测试剂盒，包括修饰有供体荧光标记的核酸发夹探针A、修饰有受体荧光标记的核酸发夹探针B、引发链、Cas12a蛋白和crRNA，其中，核酸发夹探针A和核酸发夹探针B能够在引发链的作用下发生杂交链式反应形成双链，核酸发夹探针A和核酸发夹探针B形成双链后，供体荧光标记和受体荧光标记之间能够发生荧光共振能量转移，同时，两者之间的距离为0～16个碱基，引发链能够在Cas12a蛋白的反式切割活性下发生裂解，Cas12a蛋白能够和crRNA结合形成靶向靶标核酸的二元复合物。

公开(公告)号：CN113969308A

公开(公告)日：2022-01-25

申请号：CN202111265031.6

申请日：2021-10-28

Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所

Inventor： 韩坤 ,  鞠婷 ,  翟星帏 ,  吴雪兰 ,  李靖雯

IPC: C12Q1/6816

Abstract: 本发明公开了一种基于基因编辑和流式分析技术的核酸检测方法，该方法为：先将待检测样品、CRISPR‑Cas12a蛋白、crRNA、引发剂混合，孵育；再加入磁珠反应，反应后分离取出磁珠，洗涤后再与修饰有标记物的发夹核酸混合，孵育；最后将反应后的磁珠分离取出，洗涤后通过流式细胞术检测荧光强度，再计算出待检测样品中的待检测的核酸靶标的浓度。本发明结合CRISPR‑Cas12a、杂交链式反应(HCR)和流式细胞术构建了一种快速检测DNA的方法，可在短时间内高效识别靶标，具有高特异性、高灵敏度等优点，检测限低至2pM，有望成为生物医学研究和临床诊断的有力检测手段。