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公开(公告)号：CN114107391B
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202010897362.0
申请日：2020-08-31
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 , 苏州市中心血站
IPC: C12N15/866 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用染料木黄铜增强AAV介导的基因表达的方法，该方法包括以下步骤：1)制备重组质粒；2)制备重组Bacmid；3)利用步骤2)得到的重组Bacmid制备杆状病毒；4)利用步骤3)得到的杆状病毒制备重组rAAV病毒，然后进行纯化；5)在染料木黄铜的促进作用下，利用步骤4)得到的纯化后的重组rAAV病毒转染T淋巴细胞：先将染料木黄铜试剂与T淋巴细胞共孵育，然后用重组rAAV病毒转染T淋巴细胞。本发明通过利用染料木黄铜(Genistein)的酪氨酸激酶抑制剂的特点，将其与AAV介导的基因治疗联合起来使用，显著提高了AAV介导的基因在T淋巴细胞的表达效果。
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公开(公告)号：CN105524943A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610020641.2
申请日：2016-01-13
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: C12N15/866
CPC classification number: C12N15/86 , C12N2710/14041
Abstract: 本发明公开了一种基于双链微载体将CAR基因定点整合至T细胞AAVS1位点的方法，其包括用来携带CAR基因的双链微载体，命名为CELiDCAR；帮助微载体定点整合至人19号染色体AAVS1位点的质粒，命名为pCMV-Rep；载体体外共转染人T细胞的方法；T细胞体外筛选扩增的方法；定点整合CAR-T细胞的功能鉴定方法。本发明可实现CAR基因在T细胞内的定点整合于19号染色体AAVS1位点的人T细胞，改造过的人T细胞能够表达CAR受体，在体外激活试验中能够识别其特异性的抗原并激活T细胞，从而本发明能够极大的提高CAR-T细胞的安全性，具有潜在的临床应用价值。
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公开(公告)号：CN104087613A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410307720.2
申请日：2014-06-30
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 一种基于AAV-ITR的基因表达微载体及其构建方法和应用。该微载体包括用于表达外源基因的基因表达框，所述基因表达框两端分别连接有AAV基因组的ITR序列。其中，所述基因表达框优选采用线性表达框，包含在两段ITR序列之间依次分布的CMV增强子、Chickenβ-actin启动子、多克隆位点和SV40-Ploy(A)。尤为优选的，所述AAV基因组的ITR序列中不包含D序列。该微载体的构建方法包括：依次构建含有基因表达微载体序列的质粒pUC57-minivector、微载体扩增质粒pUC57-minivector-EGFP等，经酶切、热变性和冷却处理，获得目标产物。本发明的微载体可以在宿主细胞中高效、稳定持久的表达外源基因，且无副作用，安全性高，同时，其构建方法简单，成本低廉，易于规模化实施，有望在基因治疗或基因工程等领域广泛应用。
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公开(公告)号：CN107937441B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201711123952.2
申请日：2017-11-14
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: C12N15/864 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种AAVS1位点定点整合外源基因的人iPS细胞的构建方法，其包括：构建含有外源基因的第一重组质粒，并将其包装得到第一rAAV；构建含有AAV Rep78的第二重组质粒，并将其包装得到第二rAAV；第一rAAV和第二rAAV共同转导人成体细胞，将外源基因定点整合于人成体细胞19号染色体的AAVS1位点。采用本发明技术手段得到的基因工程化人成体细胞株能够稳定表达外源基因，将得到的基因工程化人成体细胞株在体外诱导成多能干细胞，能保持干细胞的多能性及分化潜能，并且稳定表达外源基因。本发明可用于赋予细胞新的功能，或用于纠正/补偿由于基因异常/缺陷所引起的疾病，或为干细胞基因治疗提供一种可行的方法。
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公开(公告)号：CN105624192B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201610055822.9
申请日：2016-01-27
Applicant: 北京市结核病胸部肿瘤研究所 , 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: C12N15/864
Abstract: 本发明公开了一种稳定分泌近红外荧光标记外泌体的乳腺癌细胞株的制备方法，通过构建一种融合表达近红外荧光iRFP682蛋白和CD63蛋白的质粒载体，然后用此质粒包装的重组腺相关病毒(rAAV)和辅助病毒以一定比例共感染人乳腺癌MDA‑MB‑231细胞，筛选获得能稳定表达近红外荧光蛋白iRFP682标记的外泌体的人乳腺癌MDA‑MB‑231细胞，然后采用分步离心法分离提纯近红外荧光蛋白iRFP682标记的外泌体进行鉴定。本发明最终得到一个可用于乳腺癌肿瘤微环境体内体外研究的新型生物标志物，为进一步研究细胞间物质转移机制提供了有力工具，同时也给癌症的诊断和治疗方案提供新的支持和契机。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107937441A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201711123952.2
申请日：2017-11-14
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: C12N15/864 , C12N5/10
CPC classification number: C12N5/0696 , C12N15/86 , C12N2510/00 , C12N2750/14143
Abstract: 本发明提供了一种AAVS1位点定点整合外源基因的人iPS细胞的构建方法，其包括：构建含有外源基因的第一重组质粒，并将其包装得到第一rAAV；构建含有AAV Rep78的第二重组质粒，并将其包装得到第二rAAV；第一rAAV和第二rAAV共同转导人成体细胞，将外源基因定点整合于人成体细胞19号染色体的AAVS1位点。采用本发明技术手段得到的基因工程化人成体细胞株能够稳定表达外源基因，将得到的基因工程化人成体细胞株在体外诱导成多能干细胞，能保持干细胞的多能性及分化潜能，并且稳定表达外源基因。本发明可用于赋予细胞新的功能，或用于纠正/补偿由于基因异常/缺陷所引起的疾病，或为干细胞基因治疗提供一种可行的方法。
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公开(公告)号：CN105866080A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610206584.7
申请日：2016-04-05
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: G01N21/64 , G01N33/579
Abstract: 本发明公开了一种重组鲎三因子试剂，其包含如下组分：无内毒素水；无热源Tris缓冲液；吐温?20；荧光底物；重组鲎C因子；重组鲎B因子；重组鲎凝固酶原因子。本发明提供一种重组鲎三因子试剂及其检测内毒素方法，通过利用昆虫杆状病毒表达系统表达出重组鲎三因子(凝固酶原、B和C因子)，用于检测细菌内毒素，此方法排除了G因子旁路干扰，从而有效地避免了葡聚糖产生假阳性的可能性，并且解决了鲎数量有限、鲎试剂各批次不稳定性的缺点，可作为新型内毒素检测试剂。
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公开(公告)号：CN103436549B
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201310115293.3
申请日：2013-04-03
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种重组Sushi多肽的表达质粒体系、其构建方法及应用。作为本发明技术方案的典型实施方案之一，其可以包括：利用蛋白质体外剪切系统，在特定位点断开鲎C因子中能与内毒素结合的功能片段，分别连接到断裂蛋白质内含子的N端片段(IN)和C端片段(IC)在大肠杆菌中表达，表达产物经纯化，复性以及内毒素去除后，体外诱导该蛋白质内含子发生剪切，得到C因子中CES12片段，即，具有内毒素结合活性的重组Sushi多肽。本发明能够实现鲎C因子中具有内毒素结合活性的功能片段的快速、大量以及低成本表达，并可有效避免宿主细胞中所含LPS的影响，有利于低成本内毒素检测试剂的规模化生产和应用。
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公开(公告)号：CN103436549A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310115293.3
申请日：2013-04-03
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种重组Sushi多肽的表达质粒体系、其构建方法及应用。作为本发明技术方案的典型实施方案之一，其可以包括：利用蛋白质体外剪切系统，在特定位点断开鲎C因子中能与内毒素结合的功能片段，分别连接到断裂蛋白质内含子的N端片段(IN)和C端片段(IC)在大肠杆菌中表达，表达产物经纯化，复性以及内毒素去除后，体外诱导该蛋白质内含子发生剪切，得到C因子中CES12片段，即，具有内毒素结合活性的重组Sushi多肽。本发明能够实现鲎C因子中具有内毒素结合活性的功能片段的快速、大量以及低成本表达，并可有效避免宿主细胞中所含LPS的影响，有利于低成本内毒素检测试剂的规模化生产和应用。
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公开(公告)号：CN104531895B
公开(公告)日：2017-07-21
申请号：CN201410690322.3
申请日：2014-11-25
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明提供了一种测定病毒滴度的方法，利用病毒感染细胞的侧向角散射的变化测定病毒的滴度。本发明的方法，避免了现有技术中测定病毒滴度普遍存在的判断结果主观性过强、测定结果不够准确的问题，可以客观的记录数据，其测定结果具有优越的准确度和精密度。同时还具有操作简单、成本较低的优点，可实现更广泛的应用。
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