公开(公告)号：CN112285265B

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN201910670329.1

申请日：2019-07-24

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  孙明伟 ,  梁振 ,  单亦初 ,  李洋 ,  赵宝锋 ,  杨开广 ,  张玉奎

IPC: G01N30/89 ,  G01N30/72 ,  G01N30/06 ,  G01N30/08 ,  G01N30/14 ,  G01N30/88 ,  C12P21/06

Abstract: 本发明涉及一种基于镜像酶正交原理的蛋白质甲基化修饰反向富集新方法及应用，包括胰蛋白酶镜像酶(胰蛋白酶N端羧肽酶)酶切甲基化修饰和无甲基化修饰赖氨酸和精氨酸N端肽键、肽段N末端α氨基的选择性标记、trypsin等酶切无甲基化修饰赖氨酸和精氨酸C端肽键、氨基活性材料辅助去除无甲基化修饰肽段及LC‑MS/MS分析。本发明的优点是一种不依赖抗体的蛋白质甲基化富集方法，实现赖氨酸单甲基化修饰、赖氨酸二甲基化修饰、赖氨酸三甲基化修饰、精氨酸单甲基化修饰以及精氨酸二甲基化修饰同时富集。

公开(公告)号：CN112285265A

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN201910670329.1

申请日：2019-07-24

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  孙明伟 ,  梁振 ,  单亦初 ,  李洋 ,  赵宝锋 ,  杨开广 ,  张玉奎

IPC: G01N30/89 ,  G01N30/72 ,  G01N30/06 ,  G01N30/08 ,  G01N30/14 ,  G01N30/88 ,  C12P21/06

Abstract: 本发明涉及一种基于镜像酶正交原理的蛋白质甲基化修饰反向富集新方法及应用，包括胰蛋白酶镜像酶(胰蛋白酶N端羧肽酶)酶切甲基化修饰和无甲基化修饰赖氨酸和精氨酸N端肽键、肽段N末端α氨基的选择性标记、trypsin等酶切无甲基化修饰赖氨酸和精氨酸C端肽键、氨基活性材料辅助去除无甲基化修饰肽段及LC‑MS/MS分析。本发明的优点是一种不依赖抗体的蛋白质甲基化富集方法，实现赖氨酸单甲基化修饰、赖氨酸二甲基化修饰、赖氨酸三甲基化修饰、精氨酸单甲基化修饰以及精氨酸二甲基化修饰同时富集。

公开(公告)号：CN111208244A

公开(公告)日：2020-05-29

申请号：CN201811397614.2

申请日：2018-11-22

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  孙明伟 ,  梁振 ,  单亦初 ,  赵宝锋 ,  杨开广 ,  张玉奎

IPC: G01N30/88 ,  G01N30/08

Abstract: 本发明涉及一种非抗体依赖的蛋白质甲基化修饰富集分析新方法及应用，包括Lys-C/Trypsin/Arg-C连续酶切、酶切肽段N段氨基的固定、甲基化修饰肽段的选择性释放及LC-MS/MS分析及数据解析甲基化修饰位点信息。首先对含有蛋白质甲基化修饰的样本进行Lys-C/Trypsin/Arg-C多种酶切消化，然后将连续酶切得到的肽段与氨基反应活性材料反应，实现肽段的固定，最后利用特异性酶对固定肽段中含有甲基化修饰的赖氨酸和精氨酸N端肽键特异性酶切。本发明的优点是实现了多种类型低丰度蛋白质甲基化修饰的同时富集，包括赖氨酸二甲基化修饰、赖氨酸三甲基化修饰、精氨酸单甲基化修饰以及精氨酸二甲基化修饰。

公开(公告)号：CN111208243A

公开(公告)日：2020-05-29

申请号：CN201811390002.0

申请日：2018-11-21

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  李洋 ,  孙明伟 ,  单亦初 ,  杨开广 ,  张玉奎

IPC: G01N30/08 ,  G01N30/14

Abstract: 本发明涉及一种基于阴离子交换色谱柱的SUMO化肽段的富集方法，包括：蛋白质碱性位点酶切、在碱性环境中通过阴离子交换色谱柱去除保留弱的酶解肽段、收集保留较强的SUMO化肽段流出液。首先对蛋白的碱性位点进行酶切，酶切后的SUMO化肽段有多个酸性氨基酸，在碱性环境中其在阴离子交换色谱柱中的保留较非SUMO化肽段更强，采用阴离子交换色谱柱先对保留较弱的酶切产物进行洗脱，最后收集保留较强的肽段组分，即为富集后的SUMO化肽段。本发明的优点是操作步骤简单方便、选择性高、富集效率高、可同时富集多类型的SUMO化肽段、提高了SUMO化修饰位点的鉴定覆盖度。

公开(公告)号：CN111208243B

公开(公告)日：2022-05-17

申请号：CN201811390002.0

申请日：2018-11-21

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  李洋 ,  孙明伟 ,  单亦初 ,  杨开广 ,  张玉奎

IPC: G01N30/08 ,  G01N30/14

Abstract: 本发明涉及一种基于阴离子交换色谱柱的SUMO化肽段的富集方法，包括：蛋白质碱性位点酶切、在碱性环境中通过阴离子交换色谱柱去除保留弱的酶解肽段、收集保留较强的SUMO化肽段流出液。首先对蛋白的碱性位点进行酶切，酶切后的SUMO化肽段有多个酸性氨基酸，在碱性环境中其在阴离子交换色谱柱中的保留较非SUMO化肽段更强，采用阴离子交换色谱柱先对保留较弱的酶切产物进行洗脱，最后收集保留较强的肽段组分，即为富集后的SUMO化肽段。本发明的优点是操作步骤简单方便、选择性高、富集效率高、可同时富集多类型的SUMO化肽段、提高了SUMO化修饰位点的鉴定覆盖度。

公开(公告)号：CN111208245A

公开(公告)日：2020-05-29

申请号：CN201811397617.6

申请日：2018-11-22

Applicant: 中国科学院大连化学物理研究所

Inventor： 张丽华 ,  孙明伟 ,  单亦初 ,  梁振 ,  杨开广 ,  梁玉 ,  张玉奎

IPC: G01N30/88

Abstract: 本发明涉及一种基于胍基化标记的蛋白质N末端肽段反向富集的分析方法及应用，包括赖氨酸ε-氨基及多肽N端氨基的胍基化标记、胍基化试剂的去除，胍基化赖氨酸C端肽键的胰蛋白酶酶切及非蛋白质N末端肽段的选择性去除。首先建立能够高效胍基化标记赖氨酸ε-氨基及多肽N端氨基的标记条件及过量标记试剂的选择性去除，然后将优化好的标记条件用于蛋白质中的N端氨基和赖氨酸ε-氨基胍基化标记，利用氨基活性材料与酶切产生肽段的N端氨基反应，从而实现蛋白质N端肽段反向富集。本发明的优点是高效的赖氨酸ε-氨基及肽端N段氨基胍基化标记、高效的离子化率，提高了蛋白质N端肽段反向富集率及鉴定深度。