公开(公告)号：CN117964731A

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202410089428.1

申请日：2024-01-23

Applicant: 中国石油大学(华东)

Inventor： 黄方 ,  朱文慧 ,  张庆硕 ,  虎祥 ,  钱爱枝 ,  赵锦程 ,  王晓娟

IPC: C07K14/47 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种鼠源膜突蛋白(Moesin)的FERM结构域的制备。根据鼠源膜突蛋白的FERM结构域的编码基因核苷酸序列进行密码子优化，得到偏好于大肠肝菌表达的核苷酸序列，含有组氨酸、蛋白酶酶切位点。通过镍离子亲和层析和离子交换层析获得重组蛋白，并对重组蛋白进行TEV酶酶切组氨酸标签和亲和层析去除TEV酶获得鼠源膜突蛋白的FERM结构域。本发明通过试验得知膜突蛋白FERM结构域的宿主细胞为E.coli BL21(DE3)，表达载体为pET‑28a时蛋白表达量最高。本发明提供的FERM结构域制备方法简单、高效，得到的鼠源膜突蛋白FERM结构域完整，对于研究FERM结构域结构与功能具有积极的意义。

公开(公告)号：CN117924456A

公开(公告)日：2024-04-26

申请号：CN202410090212.7

申请日：2024-01-23

Applicant: 中国石油大学(华东)

Inventor： 黄方 ,  朱文慧 ,  张庆硕 ,  虎祥 ,  钱爱枝 ,  赵锦程 ,  王晓娟

IPC: C07K14/47 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种鼠源膜组织延伸刺突蛋白(膜突蛋白)的碳末端结构域(CTD)的制备。根据鼠源膜突蛋白CTD结构域的编码基因(核苷酸序列)进行密码子优化，得到偏好于大肠杆菌表达的基因序列，该基因除编码CTD结构域之外，还含有组氨酸标签(6×His)和TEV蛋白酶酶切位点，便于目标产品的纯化。本发明通过比较得知宿主细胞为E.coli BL21(DE3)，表达载体为pET‑28a时蛋白表达量最高。通过上述改进使得在大肠杆菌表达系统中可以获得更高的蛋白表达量，从而能够得到完整的鼠源膜突蛋白CTD结构域，并具有与膜突蛋白的FERM结构域相结合的活性。因此，该方法对于研究膜突蛋白的结构与功能具有重要的意义。