公开(公告)号：CN119351529A

公开(公告)日：2025-01-24

申请号：CN202411571142.3

申请日：2024-11-06

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  赵铭琪 ,  安然 ,  宋子婷 ,  孙文华

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于核酸检测技术领域，涉及一种灵敏检测完整miRNA的方法，该方法通过加入一条RNA探针链和两条DNA辅助链，两条DNA辅助链与探针链和完整的靶标miRNA杂交后形成两个Nick结构，在连接酶作用下封闭Nick形成封闭的环状RNA，最后经滚环反转录及恒温指数扩增步骤产生信号。而末端缺少部分核苷酸的非完整miRNA杂交后会形成Gap结构，难以连接或不能连接，经扩增步骤后，最终难以产生信号或者不能产生信号。该方法用于精准检测完整靶标miRNA，对于完整靶标miRNA的检测限可达到100fM，且即使靶标miRNA只存在1nt缺失也不会造成假阳性结果。

公开(公告)号：CN117737055A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311771029.5

申请日：2023-12-21

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  胡坤灵 ,  安然

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明属于测序文库构建技术领域。为解决平末端接头在连接过程中易自连接产生接头二聚体的问题，本发明提供一种平末端接头、试剂盒及测序文库构建方法。所述平末端接头包括完全互补区连续错配区，所述完全互补区和连续错配区由单链形成，所述单链的5′端和3′端存在反向互补序列，反向互补序列之间的序列为连续错配区，连续错配区突出形成环；或者所述完全互补区和连续错配区由双链形成，双链的至少一端为完全互补区，与之紧邻的为连续错配区，所述连续错配区形成泡状结构或支架结构。本发明提供的接头序列结构可有效抑制接头自连接，并且不影响待测序列与接头的高效连接，可广泛应用于各测序平台。

公开(公告)号：CN112002376B

公开(公告)日：2024-03-19

申请号：CN202010810371.1

申请日：2020-08-13

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  安然 ,  王晨儒 ,  陈辉 ,  柳鸿芳 ,  王红钰 ,  杨泰维

IPC: G16B30/00 ,  G06N3/123 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明涉及信息技术领域，针对现有DNA的信息存储方法存在信息存储密度低，信息载体DNA制备成本高昂且不稳定，读取需依靠特殊仪器以及测序数据处理过程繁琐的缺点，提供一种利用DNA分子记录和读取信息的方法，预先确定DNA序列与字符之间的唯一对应关系以及顺序索引序列，结合固定的起始标记序列和终止标记序列将待存储信息划分到若干小型单链环状DNA中；再以这些单链环状DNA为模板进行超分支滚环扩增；然后将扩增得到的长双链产物用纳米孔测序仪测序。本发明以小型单链环状DNA作为信息存储载体，更为稳定，不易降解；存储密度极高，并且处于开放状态；仅需选取少量的测序结果进行比对即可实现对所存储信息的准确读取。

公开(公告)号：CN115868637B

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202211487280.4

申请日：2022-11-25

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  马婉芝 ,  安然

IPC: A61K9/50 ,  A23L33/19 ,  A23L33/10 ,  A23L33/13

Abstract: 本发明属于纳米食品领域，具体涉及一种制备虾青素/DNA/乳铁蛋白纳米颗粒的方法及其应用，主要解决现有的虾青素微/纳米制剂制备条件严苛，制备过程中使用有毒溶剂，制备工艺复杂，且不方便储存的问题。制备过程中利用具有良好的生物功能活性的天然大分子乳铁蛋白和鲑鱼精DNA之间的静电相互作用，通过调整工艺参数可控制备荷载不同虾青素聚集体的纳米悬液。通过添加冷冻干燥保护剂海藻糖、甘露醇及壳寡糖，采用真空冷冻干燥工艺制备得到的纳米冻干粉复溶性良好，能够在液体食品基质中快速溶解。虾青素/DNA/乳铁蛋白纳米冻干粉制备工艺简单，条件温和，生产成本低，绿色无污染，便于工业化推广。

公开(公告)号：CN115807048A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202210849128.X

申请日：2022-07-19

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  陈辉 ,  安然

IPC: C12P19/34 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明属于核酸技术领域，为解决现有方法中RNA与转录模板过多结合导致聚合酶的聚合反应受阻、核糖核酸酶H与转录模板的结合影响聚合酶延伸速率的问题，本发明提供一种制备双链RNA的方法。首先，针对要制备的双链RNA，设计含有错配且序列完全对称的泡状结构的环状双链DNA模板；然后设计短链DNA作为辅助链；接着，在体系中同时加入环状双链DNA模板、RNA聚合酶、RNase H、辅助链、NTPs、RNA酶抑制剂、无机焦磷酸酶进行转录。转录出的RNA与泡状结构处的单链DNA结合非常弱，降低了对RNA聚合酶的聚合反应的阻碍；RNase H的酶切位点不在环状双链DNA模板的泡状结构处，避免了对聚合酶延伸的影响。

公开(公告)号：CN111004804B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN201911273424.4

申请日：2019-12-12

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 林洪 ,  沙隽伊 ,  隋建新 ,  安然 ,  王赛 ,  曹立民

IPC: C12N15/115 ,  G01N33/53 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明提供一种用于快速同时检测恩诺沙星和环丙沙星的适配体、试剂盒及其应用。本发明基于目前已有的长度分别为60‑mer和98‑mer的恩诺沙星和环丙沙星适配体，通过对其二级结构、三级结构进行计算机模拟及与靶标模拟对接，在此基础上找到并对其结合位点进行剪短及拼接，得到一条长度为37‑mer的适配体，通过实验验证其仅对恩诺沙星和环丙沙星具有较高结合特异性。本发明同时对已有的两条适配体建立了适配体纳米金检测法方法，可用于实际样品中恩诺沙星和环丙沙星的检测。

公开(公告)号：CN114807331A

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202210517930.9

申请日：2022-05-12

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  胡坤灵 ,  宋子婷 ,  安然

IPC: C12Q1/6869

Abstract: 本发明涉及DNA测序技术领域。针对短链DNA难以进行纳米孔测序的问题，本发明提供一种短链DNA的纳米孔测序方法：待测的短链DNA，待测区T的两侧分别为B区和C区，B区和C区为互不包含的DNA片段；以短链DNA为模板设计引物对；以短链DNA为模板，以设计的引物对进行PCR扩增，得到重复含待测区T的DNA长双链；将扩增的DNA长双链进行纳米孔测序、分析结果，确定具体序列。本发明仅需选取少量的测序结果进行比对即可实现对待测序列的准确测定，只需分析一个足够长的Read即可完成对短链DNA的测序，在一次纳米孔测序操作中，可用于同时测多个序列组成的基因组。

公开(公告)号：CN111321143B

公开(公告)日：2021-09-17

申请号：CN202010094558.6

申请日：2020-02-16

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  陈辉 ,  安然 ,  程凯

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  G16B15/00

Abstract: 本发明属于核酸技术领域，具体涉及一种制备环状RNA的方法，主要解决线性RNA成环过程中存在的大分子聚合副产物随着底物浓度的增加而急剧增加，目的环状RNA产率低；并需要借助夹板链或辅助链，后期处理步骤繁琐的问题。针对要连接成环的线性RNA序列，先用Mfold或RNAstructure program等软件模拟成环后的二级结构，根据环状RNA的二级结构设计断开位点；以设计好的线性RNA为原料，采用T4RNA连接酶2(T4RNA Ligase 2)直接进行连接。连接过程中无需借助夹板链或辅助链，降低了后续纯化工艺的难度；成环的过程当中大分子副产物的产生被显著抑制，从而实现了目的环状RNA的高效制备。

公开(公告)号：CN111321143A

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN202010094558.6

申请日：2020-02-16

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  陈辉 ,  安然 ,  程凯

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  G16B15/00

Abstract: 本发明属于核酸技术领域，具体涉及一种制备环状RNA的方法，主要解决线性RNA成环过程中存在的大分子聚合副产物随着底物浓度的增加而急剧增加，目的环状RNA产率低；并需要借助夹板链或辅助链，后期处理步骤繁琐的问题。针对要连接成环的线性RNA序列，先用Mfold或RNAstructure program等软件模拟成环后的二级结构，根据环状RNA的二级结构设计断开位点；以设计好的线性RNA为原料，采用T4RNA连接酶2(T4RNA Ligase 2)直接进行连接。连接过程中无需借助夹板链或辅助链，降低了后续纯化工艺的难度；成环的过程当中大分子副产物的产生被显著抑制，从而实现了目的环状RNA的高效制备。

公开(公告)号：CN108913736A

公开(公告)日：2018-11-30

申请号：CN201810748988.8

申请日：2018-07-10

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 梁兴国 ,  曹娟娟 ,  安然

IPC: C12P19/34

Abstract: 本发明涉及一种单链寡核苷酸的制备方法，首先进行PEAR反应，模板为N’-X’-R’-N’-X’，R’为能产生3’突出末端的耐高温限制性内切酶的识别位点，N’为切刻内切酶的识别位点，经过高温变性、退火、延伸，得到延伸产物双链N’-X’-R’-N’-X’/N-X-R-N-X；利用能产生3’突出末端的限制性内切酶对双链进行切割，得到片段(N-X/N’-X’)；没有被酶切的双链作为模板直接参与下一轮的扩增，而且模板在退火过程中通过滑动作用而继续延伸，串联重复序列增加，目的产物持续指数增长。然后进行切口引物延伸反应，切刻内切酶对PEAR酶切产物中的N-X链进行切割，产生单链缺口，另外一条单链保持完整，随后聚合酶以缺口为起点进行延伸，切刻内切酶识别位点重新形成；同时通过置换下游的目的单链X，得到游离的单链。