公开(公告)号：CN116183470B

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202211658459.1

申请日：2022-12-22

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所

Inventor： 刘颖丽 ,  赵树堂 ,  郭英华 ,  胡梦璇 ,  赵新伟 ,  卢孟柱

IPC: G01N15/1433 ,  G01N15/01 ,  G01N1/28 ,  G01N1/30 ,  G01N1/40

Abstract: 本发明公开了一种基于细胞流式分选的木本植物细胞程序性死亡检测方法，属于细胞检测技术领域，包括如下步骤：木质部细胞原生质体制备及AnnexinV、PI染色处理；对染色的木质部细胞原生质体进行成像流式检测处理；对染色的木质部细胞原生质体进行流式分群、分选；对分选后不同凋亡亚群细胞显微成像检测其形态；提取分选后不同凋亡亚群细胞的RNA，利用RT‑qPCR检测细胞程序性死亡及材性形成相关基因的表达量。本发明检测木本植物细胞程序性死亡的方法，通过流式细胞仪分群分析出不同凋亡阶段细胞个数，得出不同阶段凋亡率；又进一步通过流式细胞仪对不同凋亡亚群细胞进行分选，通过RT‑qPCR鉴定相关基因表达水平；该方法利用流式细胞仪分选木质部细胞程序性死亡不同阶段的特定细胞，具有定量可靠，分析准确，结果精度高等优点。

公开(公告)号：CN116183470A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202211658459.1

申请日：2022-12-22

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所

Inventor： 刘颖丽 ,  赵树堂 ,  郭英华 ,  胡梦璇 ,  赵新伟 ,  卢孟柱

IPC: G01N15/14 ,  G01N1/28 ,  G01N1/30 ,  G01N1/40

Abstract: 本发明公开了一种基于细胞流式分选的木本植物细胞程序性死亡检测方法，属于细胞检测技术领域，包括如下步骤：木质部细胞原生质体制备及AnnexinV、PI染色处理；对染色的木质部细胞原生质体进行成像流式检测处理；对染色的木质部细胞原生质体进行流式分群、分选；对分选后不同凋亡亚群细胞显微成像检测其形态；提取分选后不同凋亡亚群细胞的RNA，利用RT‑qPCR检测细胞程序性死亡及材性形成相关基因的表达量。本发明检测木本植物细胞程序性死亡的方法，通过流式细胞仪分群分析出不同凋亡阶段细胞个数，得出不同阶段凋亡率；又进一步通过流式细胞仪对不同凋亡亚群细胞进行分选，通过RT‑qPCR鉴定相关基因表达水平；该方法利用流式细胞仪分选木质部细胞程序性死亡不同阶段的特定细胞，具有定量可靠，分析准确，结果精度高等优点。

公开(公告)号：CN116004653B

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202211256206.1

申请日：2022-10-13

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所 ,  泰安市泰山林业科学研究院

Inventor： 赵树堂 ,  赵新伟 ,  郭伟 ,  刘颖丽 ,  胡梦璇 ,  卢孟柱

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C07K14/415 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种调控杨树木质部发育的PagERF81基因及其应用，涉及生物基因工程技术领域；PagERF81基因的编码区核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明通过CRISPR/Cas9敲除PagERF81基因，转基因杨树与野生型比较，木质部区域中导管细胞数量增加，导管细胞面积减少，且木质素含量显著提高，说明PagERF81能够调控杨树木质部发育，且显著抑制木质素合成。本发明为木质素合成的调控手段提供了新的选择，在林木基因工程领域有重要应用价值。

公开(公告)号：CN116004653A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211256206.1

申请日：2022-10-13

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所 ,  泰安市泰山林业科学研究院

Inventor： 赵树堂 ,  赵新伟 ,  郭伟 ,  刘颖丽 ,  胡梦璇 ,  卢孟柱

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C07K14/415 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种调控杨树木质部发育的PagERF81基因及其应用，涉及生物基因工程技术领域；PagERF81基因的编码区核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明通过CRISPR/Cas9敲除PagERF81基因，转基因杨树与野生型比较，木质部区域中导管细胞数量增加，导管细胞面积减少，且木质素含量显著提高，说明PagERF81能够调控杨树木质部发育，且显著抑制木质素合成。本发明为木质素合成的调控手段提供了新的选择，在林木基因工程领域有重要应用价值。

公开(公告)号：CN114292855B

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202111405818.8

申请日：2021-11-24

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所

Inventor： 赵树堂 ,  胡梦璇 ,  郭伟 ,  刘颖丽 ,  赵新伟 ,  卢孟柱

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种调控杨树木质部发育的PagARR9基因及其应用，涉及生物基因工程技术领域；PagARR9基因的编码区核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明通过将PagARR9基因转入杨树，过量表达PagARR9的转基因杨树与野生型比较，木质部显著减少，通过CRISPR/Cas9敲除PagARR9基因，转基因杨树与野生型比较，木质部显著增加；说明细胞分裂素响应调节因子基因PagARR9，是调控杨树木质部发育的关键调节因子。本发明为木质部发育的调控手段提供了新的选择，在林木基因工程领域有重要应用价值。