公开(公告)号：CN112111443A

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202011015336.7

申请日：2020-09-24

Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所

Inventor： 王军辉 ,  樊二勤 ,  王智 ,  麻文俊 ,  卢楠 ,  付鹏跃 ,  曲冠证 ,  刘彩霞

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明提供了一种楸树木质部原生质体分离和转化的方法，其包括如下步骤：S1、选择温室内生长健康的楸树植株，将茎段去皮后，浸泡于酶解液中避光静置；S2、酶解结束后，将茎段转移到MMG溶液中，轻轻摇晃，以释放酶解完的原生质体细胞；随后进行过滤以去除杂质，并通过水平离心进行原生质体收集；最后加入适量MMG重悬细胞，获得原生质体溶液；S3、利用氯化铯梯度离心的方法进行高纯度质粒的提取；S4、利用PEG介导的方式进行原生质体高效转化。本发明提供的方法以楸树木质部为材料进行原生质体分离和转化，分离得到的原生质体具有杂质少，数量多的优点，可获得高质量的楸树原生质体，同时提供了系统高效的转化方法，为木本植物的分子生物学研究提供了重要工具。