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公开(公告)号：CN111187781A
公开(公告)日：2020-05-22
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN112125960A
公开(公告)日：2020-12-25
申请号：CN202010878710.X
申请日：2020-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/20 , C07K1/14 , C07K1/30 , C07K1/18 , C12N15/70 , C12N15/34 , C12P21/02 , A61K39/295 , A61K39/12 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种适用于大规模工厂化生产操作的去除内毒素的通用方法。本发明将液相分离去除内毒素法和疏水层析去除内毒素法进行了结合和改进，保留了液相分离法高效去除内毒素的优点和疏水层析法适合大规模工厂化操作的优点，去掉了液相分离法中繁琐的离心和萃取以及疏水层析法中的高盐步骤。本发明可用于重组蛋白中内毒素的去除，也可用于制药业的药液中内毒素的去除，经过本发明的方法处理后，最终蛋白溶液中内毒素的含量为不超过10EU/mL或10EU/mg(目的蛋白)，通过本方法，能够以较低的成本将兽用疫苗中内毒素的含量控制到和人用疫苗相近的标准。本发明的一种去除内毒素的方法，具有高效、高回收率、低成本、易于大规模工厂化生产操作的特点。
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公开(公告)号：CN111471102A
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN202010325058.9
申请日：2020-04-23
Applicant: 西北农林科技大学 , 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明适用于生物技术领域，提供了一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用，该抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该抗独特型纳米抗体是通过噬菌体展示技术成功筛选到所需抗独特型纳米抗体的编码基因，接着，将该编码基因连接到毕赤酵母表达载体中，并电转化至毕赤酵母感受态细胞培养制得的。该抗独特型纳米抗体能够特异性地阻断单抗1E7与PCV2 Cap蛋白的结合，具有模拟PCV2 Cap关键抗原表位的作用，其可用于开发防治PCV2的抗独特性纳米抗体疫苗、诊断试剂及生物试剂等。
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公开(公告)号：CN111187781B
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN112125960B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202010878710.X
申请日：2020-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/20 , C07K1/14 , C07K1/30 , C07K1/18 , C12N15/70 , C12N15/34 , C12P21/02 , A61K39/295 , A61K39/12 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种适用于大规模工厂化生产操作的去除内毒素的通用方法。本发明将液相分离去除内毒素法和疏水层析去除内毒素法进行了结合和改进，保留了液相分离法高效去除内毒素的优点和疏水层析法适合大规模工厂化操作的优点，去掉了液相分离法中繁琐的离心和萃取以及疏水层析法中的高盐步骤。本发明可用于重组蛋白中内毒素的去除，也可用于制药业的药液中内毒素的去除，经过本发明的方法处理后，最终蛋白溶液中内毒素的含量为不超过10EU/mL或10EU/mg(目的蛋白)，通过本方法，能够以较低的成本将兽用疫苗中内毒素的含量控制到和人用疫苗相近的标准。本发明的一种去除内毒素的方法，具有高效、高回收率、低成本、易于大规模工厂化生产操作的特点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109536456B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN201811261025.1
申请日：2018-10-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。
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公开(公告)号：CN109536456A
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201811261025.1
申请日：2018-10-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术开发公司
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。
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公开(公告)号：CN112011556B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN111471102B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202010325058.9
申请日：2020-04-23
Applicant: 西北农林科技大学 , 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明适用于生物技术领域，提供了一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用，该抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该抗独特型纳米抗体是通过噬菌体展示技术成功筛选到所需抗独特型纳米抗体的编码基因，接着，将该编码基因连接到毕赤酵母表达载体中，并电转化至毕赤酵母感受态细胞培养制得的。该抗独特型纳米抗体能够特异性地阻断单抗1E7与PCV2 Cap蛋白的结合，具有模拟PCV2 Cap关键抗原表位的作用，其可用于开发防治PCV2的抗独特性纳米抗体疫苗、诊断试剂及生物试剂等。
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公开(公告)号：CN112011556A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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