公开(公告)号：CN119842769A

公开(公告)日：2025-04-18

申请号：CN202510093881.4

申请日：2025-01-21

Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

Inventor： 虞凌雪 ,  李国新 ,  刘丽萍 ,  刘云

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/27 ,  C07K14/53 ,  C12N5/0786 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种重组猫巨噬细胞集落刺激因子的原核表达质粒及其构建方法和应用，所述原核表达质粒的构建方法包括以下步骤：将合成的猫巨噬细胞集落刺激因子基因克隆至PUC57质粒中，得到PUC57‑FM‑CSF质粒；然后以合成的PUC57‑FM‑CSF质粒为模板，采用去除信号肽序列的位置设计的同源重组的引物进行PCR扩增，扩增得到的目的基因纯化后亚克隆至原核表达载体的相应位点中，再转化DH5α感受态细胞，即得。本发明首次成功构建了包含猫M‑CSF基因的质粒并在原核表达系统中获得高效表达，表达的重组蛋白纯化后显示了较高生物学活性，将为进一步研究猫M‑CSF的结构与生物学功能等提供稳定的体外研究平台，具有重大的研究意义以及临床应用价值。

公开(公告)号：CN119876266A

公开(公告)日：2025-04-25

申请号：CN202510086178.0

申请日：2025-01-20

Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

Inventor： 虞凌雪 ,  李国新 ,  刘云 ,  刘丽萍

IPC: C12N15/85 ,  C07K14/535 ,  C12N5/0786 ,  C12N15/64 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种重组猪巨噬细胞集落刺激因子的真核表达质粒及其构建方法和应用，该构建方法包括以下步骤：将合成的猪巨噬细胞集落刺激因子基因克隆至PUC57质粒中，得到PUC57‑PM‑CSF质粒；以PUC57‑PM‑CSF质粒为模板，采用在去除跨膜区序列的位置进行同源重组设计的引物进行PCR扩增，得到的目的基因亚克隆至真核表达载体的相应位点中，所得连接产物转化DH5α感受态细胞，获得鉴定正确的PM‑CSF真核表达质粒。本发明首次成功构建了包含猪M‑CSF基因的质粒并在真核表达系统中实现高效表达，表达的重组蛋白纯化后显示了较高的生物学活性，为进一步研究猪M‑CSF的结构与生物学功能，以及猪骨髓源巨噬细胞的极化及功能提供基础资料，为猪免疫评价体系的建立提供工具。