公开(公告)号：CN101812539B

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN200910242080.0

申请日：2009-12-03

Applicant: 中国兽医药品监察所

Inventor： 王琴 ,  范学政 ,  赵启祖 ,  刘俊 ,  徐璐 ,  王栋 ,  邹兴启

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明设计一种猪瘟病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒及其生产方法。本发明针对该猪瘟病毒基因组5′端非编码区的137位存在一个A/G SNP位点设计了野毒株特异的MGB探针，并在两端保守区设计了一套通用引物，经过反转录酶浓度、DNA聚合酶浓度、上下游引物浓度和探针浓度的进一步优化，建立了CSFV TaqMan-MGB PCR鉴别检测方法。灵敏度试验结果显示，该方法与RT-nPCR符合率为94.3％，且灵敏度比RT-nPCR敏感10倍；特异性试验结果显示，17个CSFV质控株检测均为阳性，HCLV株和12个非CSFV病原检出率均为零，说明该方法具有很强的CSFV特异性。该方法仅能检测猪瘟病毒野毒株，而不能检测疫苗株和其它非猪瘟病毒株。从反应时间和试验成本等方面都体现了TaqMan-MGB PCR鉴别检测CSFV的优越性。

公开(公告)号：CN101812539A

公开(公告)日：2010-08-25

申请号：CN200910242080.0

申请日：2009-12-03

Applicant: 中国兽医药品监察所

Inventor： 王琴 ,  范学政 ,  赵启祖 ,  刘俊 ,  徐璐 ,  王栋 ,  邹兴启

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明设计一种猪瘟病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒及其生产方法。本发明针对该猪瘟病毒基因组5′端非编码区的137位存在一个A/G SNP位点设计了野毒株特异的MGB探针，并在两端保守区设计了一套通用引物，经过反转录酶浓度、DNA聚合酶浓度、上下游引物浓度和探针浓度的进一步优化，建立了CSFV TaqMan-MGB PCR鉴别检测方法。灵敏度试验结果显示，该方法与RT-nPCR符合率为94.3％，且灵敏度比RT-nPCR敏感10倍；特异性试验结果显示，17个CSFV质控株检测均为阳性，HCLV株和12个非CSFV病原检出率均为零，说明该方法具有很强的CSFV特异性。该方法仅能检测猪瘟病毒野毒株，而不能检测疫苗株和其它非猪瘟病毒株。从反应时间和试验成本等方面都体现了TaqMan-MGB PCR鉴别检测CSFV的优越性。