公开(公告)号：CN119464443A

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202411533792.9

申请日：2024-10-30

Applicant: 中国人民解放军总医院第一医学中心

Inventor： 王驰 ,  王成彬 ,  郝治云 ,  李绵洋 ,  李民伟

IPC: C12Q1/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  G01N21/31 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及尿路感染检测技术领域，且公开了一种基于噬菌体的尿路感染快速精准检测方法，包括以下步骤：S1：构建CRISPR/Cas9系统；S2：构建同源重组质粒；S3：构建三质粒BL21；S4：构建、筛选并验证报告噬菌体T4::Nluc；该检测方法通过CRISPR/Cas9系统联合同源重组技术，显著提高了噬菌体基因编辑的效率，且基于报告噬菌体T4::Nluc，实现了对临床尿路感染大肠杆菌的快速、灵敏、特异、准确而简便的检测，可用于未经任何预处理的大肠杆菌尿路感染样本的检测，表现出优异的检测时效性和特异性，是临床尿路感染大肠杆菌鉴定的有力工具，为临床尿路感染的及时准确诊断和有效治疗提供了新的技术路径。

公开(公告)号：CN117368468A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202311266175.2

申请日：2023-09-27

Applicant: 中国人民解放军总医院第一医学中心 ,  江苏汇先医药技术有限公司

Inventor： 王成彬 ,  颜菁 ,  李民伟 ,  王驰

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/533 ,  G01N33/543 ,  B01L3/00

Abstract: 本发明涉及痕量病原菌检测技术领域，且公开了一种发光噬菌体偶联微流控芯片痕量病原菌检测装置，包括由进样口、反应腔、阵列式微柱、筛网、出样口、微阀、检测腔构成的微流控芯片主体，使用时对微流控芯片进行多次清洗，用flag抗体修饰微流控芯片的反应腔，之后注入flag标记的发光噬菌体进行孵育，并完成发光噬菌体的固定；培养样本病原菌，并将样本病原菌注入微流控芯片的反应腔中，完成病原菌的富集；将微流控芯片进行振荡培养，使用相应检测设备进行荧光信号的检测；本发明将发光噬菌体的特异性识别病原菌技术与微流控筛网立体阵列载体的细菌捕获与富集技术相结合，建立一套快速、准确、灵敏、特异的血流感染病原菌一体化检测系统。

公开(公告)号：CN117757824A

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202311319161.2

申请日：2023-10-12

Applicant: 中国人民解放军总医院第一医学中心 ,  江苏汇先医药技术有限公司

Inventor： 王成彬 ,  颜菁 ,  李民伟 ,  王驰

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/90 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N7/01 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/92 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，且公开了一种CRISPR技术构建报告噬菌体的方法，包括以下步骤：S1：设计Flag、His、PelB修饰Nanoluc表达框；S2：制备T7噬菌体及菌株；S3：采用Gibson组装技术，构建同源重组质粒PFN‑1000；S4：进行CRISPR‑Cas9系统构建；S5：进行sg靶序列的筛选；S6：进行PFN‑1000/pCas9/pCRISPR‑sg三质粒菌株的构建；S7：完成ELISA提纯重组噬菌体；本发明通过一种CRISPR技术构建报告噬菌体的方法应用于病原菌检测，通过pCas9/pCRISPR/PFN‑1000三质粒编辑系统，可以提高sgRNA的切割效率和靶位点选择的灵活性，提高了重组效率，且通过flag与10A基因的融合表达，解决了因同源重组效率低，筛选困难的问题；利用发光T7噬菌体可在几小时内，特异性检测出低浓度的致病菌，具有检测周期短、灵敏度特异度高和经济成本低等优势。