重组表皮生长因子EGF及其制备方法

    公开(公告)号:CN103834664A

    公开(公告)日:2014-06-04

    申请号:CN201410117214.7

    申请日:2014-03-27

    Abstract: 本发明公开了重组表皮生长因子EGF基因,它是人工体外合成的,以组氨酸标签(His6-Tag)-SUMO蛋白酶识别底物为蛋白质可溶性表达的辅助片段,以EGF为目的片段的融合表达蛋白质,并使EGF以无启动子的正确阅读框架与载体正序相连并转化进入表达菌种,最终构建与表达三种物质串联的融合蛋白。在咪唑存在下进行金属螯合介质纯化,一步获得90%纯度的融合蛋白质,利用高特异性和高活性SUMO蛋白酶对所纯化的融合蛋白质进行酶切,使标签部分HS与EGF目的蛋白解离,并利用金属螯合介质将标签部分与EGF目的蛋白分离。获得了纯度达95%的无首位Met的天然结构和活性2.2╳108IU/mg的目的蛋白的。每毫克费用由1.05元降至0.32元。

    基因工程IFNα-2b融合蛋白质新型制备工艺

    公开(公告)号:CN103805622A

    公开(公告)日:2014-05-21

    申请号:CN201410082516.5

    申请日:2014-03-08

    Abstract: 本发明提供了基因工程IFNα-2b融合蛋白质新型制备工艺,为解决无法去除错配异构体的现状,采用融合表达载体,将促进干扰素α-2b二硫键正确折叠的蛋白质及高效蛋白酶底物片段与干扰素α-2b基因融合表达,形成可溶性天然结构表达形式;目的蛋白以可溶性天然结构形式表达,活性高,无需复性处理,避免蛋白质异构体产生;蛋白质纯化工艺简洁,仅需一步金属螯合亲和层析产品纯度即可达到90%以上,去除融合蛋白片段,再利用该亲和层析获得纯度95%以上的终产品,产量高,活性明显提升,成本低;达全菌体蛋白的30%以上;获得了干扰素α-2b天然结构的表达产物,产品活性优于现有的国内和国际产品。

    重组表皮生长因子EGF及其制备方法

    公开(公告)号:CN103834664B

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201410117214.7

    申请日:2014-03-27

    Abstract: 本发明公开了重组表皮生长因子EGF基因,它是人工体外合成的,以组氨酸标签(His6-Tag)-SUMO蛋白酶识别底物为蛋白质可溶性表达的辅助片段,以EGF为目的片段的融合表达蛋白质,并使EGF以无启动子的正确阅读框架与载体正序相连并转化进入表达菌种,最终构建与表达三种物质串联的融合蛋白。在咪唑存在下进行金属螯合介质纯化,一步获得90%纯度的融合蛋白质,利用高特异性和高活性SUMO蛋白酶对所纯化的融合蛋白质进行酶切,使标签部分HS与EGF目的蛋白解离,并利用金属螯合介质将标签部分与EGF目的蛋白分离。获得了纯度达95%的无首位Met的天然结构和活性2.2╳108IU/mg的目的蛋白的。每毫克费用由1.05元降至0.32元。

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