公开(公告)号：CN117737104A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311598289.7

申请日：2023-11-27

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 刘长莉 ,  王炎伟 ,  张杰 ,  杨洪一 ,  李立新

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/53 ,  C12N15/52 ,  C12N15/55 ,  C12P7/42

Abstract: 本发明涉及一种利用适应性实验室进化合成3‑羟基丙酸的方法，属于生物技术领域。所述发明的特征在于，扩增橙色绿屈挠菌mcr基因构建质粒pA2s‑mcr，将其转入E.coli中。在所述E.coli基因组上，用CRISPR/Cas9技术，敲除ldhA基因，并用accDA与accBC基因替代pta/poxB基因。构建特异性响应3‑HP以启动下游氯霉素抗性基因(CmR)与红色荧光蛋白(mCherry)表达的传感器质粒pYB‑0055‑mCherry‑CmR，获得工程菌，将所得工程菌在含高浓度氯霉素的M9培养基中驯化，并逐步提高氯霉素浓度，筛选得到高产3‑HP的工程菌E.coli 3‑HP‑2。本技术为大规模生产3‑HP提供技术支持。