公开(公告)号：CN106496333A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201611054368.1

申请日：2016-11-25

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 单安山 ,  魏丹丹 ,  李晓丹

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/75 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04

CPC classification number: C07K14/465 ,  A61K38/00 ,  C07K14/4723 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/21 ,  C12N15/75 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明目的在于提供一种利用枯草芽孢杆菌表达杂合肽及制备方法和应用，其序列如序列表SEQ ID No.1所示。制备方法如下：人工设计融合基因SPAmyQ-SUMO-PR-FO和SPSacB-SUMO-PR-FO，在两端加入了EcoRⅠ和BamH Ⅰ酶切位点，将目的基因与表达载体pGJ148连接，利用化学方法将质粒转入到枯草芽孢杆菌感受态细胞中，利用麦芽糖诱导发酵产生融合表达产物。通过SUMO酶切后得到杂合肽PR-FO。本抗菌肽PR-FO是通过PRW4与α-螺旋型抗菌肽Fowlicidin-2进行杂合得到，与原肽PRW4相比表现出强烈的杀菌活性，较高的稳定性和细胞选择。

公开(公告)号：CN107236755A

公开(公告)日：2017-10-10

申请号：CN201710398173.7

申请日：2017-05-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 单安山 ,  李建平 ,  李晓丹

IPC: C12N15/75 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

CPC classification number: C07K14/43586 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/21 ,  C07K2319/35 ,  C12N2830/34

Abstract: 本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌表达天蚕素AD的方法及其制备方法。以枯草芽孢杆菌WB800N为宿主菌株，大肠‑枯草穿梭载体为表达载体，设计合成融合蛋白编码基因(SPSacB)SUMO‑CAD，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，成功构建重组表达载体pGJ148‑(PSacB)SUMO‑CAD。应用化学转化方式转入宿主菌感受态细胞中，利用麦芽糖诱导发酵，实现外源蛋白成功表达，通过NI‑NTA柱和蛋白质纯化分析仪纯化后获得了纯度较高的融合蛋白，利用SUMO酶切后获得重组抗菌肽，之后对发酵条件进行优化。本发明成本低，利于分离纯化。