公开(公告)号：CN118064549A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410290943.6

申请日：2024-03-14

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 胡鹏 ,  李新闻 ,  占思瑶 ,  黄松钱 ,  吴智超 ,  张钧睿

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/24

Abstract: 本发明属于生物技术应用领域，具体公开了一种适用于鱼类组织和细胞的染色质可及性分析方法。本发明适用于鱼类组织和细胞的染色质可及性分析方法，通过取样、研磨匀浆、密度梯度离心、确定核层步骤进行单细胞核的提取，提取的细胞核经过转座反应和纯化、PCR扩增、文库纯化和质检完成染色质可及性分析。该方法能够快速分离细胞系、新鲜组织、冷冻组织等鱼类不同类型样本的细胞核，获取细胞核成功率较高，细胞核形态完整，克服了一般方法分离鱼类不同类型组织和细胞样本的细胞核悬液得率低、提取成功率低以及背景污染严重的缺点，大大提高了细胞核染色质可及性分析实验的成功率。

公开(公告)号：CN118147043A

公开(公告)日：2024-06-07

申请号：CN202410290941.7

申请日：2024-03-14

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 胡鹏 ,  黄松钱 ,  徐元 ,  焦荷 ,  吴智超

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/077

Abstract: 本发明属于生物技术运用领域，具体公开了一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法。该方法基于胶原酶II和胶原酶IV组合酶解，通过目标组织取样、解离消化、清洗重悬步骤制得单细胞悬液，并针对脂肪含量高或者组织结构较为致密的情况，对清洗液和解离时间进行了优化，获得了高质量的单细胞悬液。本发明方法可以将大多数鱼类组织成功解离为单细胞悬液，适用范围广，且操作简便，制备效率高，推动了单细胞测序技术在鱼类基础生物学研究中的运用。

公开(公告)号：CN119791068A

公开(公告)日：2025-04-11

申请号：CN202510047206.8

申请日：2025-01-13

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 陈良标 ,  鲁纪刚 ,  黄松钱 ,  胡鹏 ,  李玮 ,  魏世涔 ,  黄思琪

IPC: A01K67/0276 ,  A01K67/02 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89

Abstract: 本发明公开了一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法，包括：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对鱼类kdm6bb基因进行敲降处理，通过基因型鉴定获得kdm6bb杂合子(kdm6bb+/‑)；通过杂合子鱼的自交，获得有效降低kdm6bb蛋白表达的kdm6bb杂合突变体；通过性别分子标记筛选具有XY性别遗传型的伪雌鱼，与野生型XY雄鱼交配，筛选不含kdm6bb突变的YY性别遗传型超雄鱼，与野生型XX雌鱼杂交，获得不携带kdm6bb突变的全雄鱼群体，实现鱼类单性养殖，提高性别控制育种的效率，在以XX/XY性别决定为基础的水产经济鱼类中表现广泛的适应性。

公开(公告)号：CN118127000A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410290938.5

申请日：2024-03-14

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 胡鹏 ,  黄松钱 ,  焦荷 ,  徐元 ,  吴智超

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明属于生物技术应用领域，具体公开了一种快速分离鱼类脑组织单细胞核的方法。该方法通过蔗糖密度离心和低浓度BSA洗涤，能够分离出数量较多、形态完整、背景杂质较少的高质量单细胞核，且制样简单、实验高效、具有稳定的提核效率和成功率。该方法在鱼脑的单细胞核分离方面取得成功，用于构建单细胞染色质可及性和转录组测序文库。本发明最大的突破在成功实现对冷冻保存和新鲜淡水养殖鱼类的脑组织单细胞核分离，为鱼类单细胞测序研究提供了关键的技术支撑。该方法还可用于分离其他鱼类脑组织或其余组织的高质量单细胞核悬液，提高单细胞建库实验的成功率。同时，本发明填补了对非模式生物单细胞核提取研究的空白。