公开(公告)号：CN105331621B

公开(公告)日：2019-01-29

申请号：CN201510790826.7

申请日：2015-11-17

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 施秋燕 ,  杨志刚 ,  杨青 ,  魏帮鸿 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/52 ,  C12N9/00 ,  C12N15/63 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12R1/865 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6‑F1/Elovl6‑R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA第一链，以此为模板，进行PCR反应，获得的核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据上述核心片段，分别设计3’‑Elovl6 RACE上游引物和5’‑Elovl6 RACE下游引物，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成3’‑cDNA和5’‑cDNA第一链，以此为模板，进行3’和5’末端侧翼片段RACE，将得到的3’和5’末端侧翼片段分别与载体连接，克隆并测序；(3)将得到的末端侧翼片段与核心片段进行拼接，获得中华绒螯蟹Elovl6基因的全长序列。

公开(公告)号：CN105331621A

公开(公告)日：2016-02-17

申请号：CN201510790826.7

申请日：2015-11-17

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 施秋燕 ,  杨志刚 ,  杨青 ,  魏帮鸿 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/52 ,  C12N9/00 ,  C12N15/63 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12R1/865 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6-F1/Elovl6-R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA第一链，以此为模板，进行PCR反应，获得的核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据上述核心片段，分别设计3’-Elovl6 RACE上游引物和5’-Elovl6 RACE下游引物，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成3’-cDNA和5’-cDNA第一链，以此为模板，进行3’和5’末端侧翼片段RACE，将得到的3’和5’末端侧翼片段分别与载体连接，克隆并测序；(3)将得到的末端侧翼片段与核心片段进行拼接，获得中华绒螯蟹Elovl6基因的全长序列。

公开(公告)号：CN109169478A

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201811328908.X

申请日：2018-11-09

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 杨志刚 ,  张龙 ,  王健懿 ,  魏帮鸿 ,  杨航 ,  赵雪健 ,  成永旭

IPC: A01K63/00

Abstract: 本发明公开了一种河蟹幼蟹单体养殖盒，包括盒身、盒盖、吊环、第一孔洞、盒底、第二孔洞、空隙、网布、连接板、转轴、卡扣、推拉杆和卡扣凹槽。本发明的有益效果是：吊环底部焊接设置有铜柱螺纹转杆，且该螺纹转杆采用高纯度的铜材料制作而成，能够根据需要进行悬吊养殖，并使悬吊的操作尽可能的简化第一孔洞和第二孔洞为镂空的小孔，直径为3mm，且小孔间距2cm，使盒内的河蟹幼蟹单体能够更多的与外界环境接触，卡扣通过转轴和推拉杆形成一个统一的整体且卡扣的尺寸小于卡扣凹槽，防止每次在将盒盖与盒身的开合过程都极为的繁琐，从而大大的影响了工作效率。

公开(公告)号：CN110684775A

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201910582773.8

申请日：2019-07-01

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 杨志刚 ,  张龙 ,  周俊宇 ,  魏帮鸿 ,  董文静 ,  成永旭

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C07K14/435 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种中华绒螯蟹NKCC基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1。还公开了该基因的克隆方法，包括：对不同物种NKCC氨基酸序列比对后设计引物，中华绒螯蟹腮总RNA反转录成cDNA并经PCR扩增，获取NKCC基因核心片段；根据核心片段设计3’和5’端引物，将提取的总RNA反转录成3’和5’cDNA第一链，以此为模板RACE，获取3’和5末端RACE片段；将3’和5末端RACE片段分别与核心片段连接，得到NKCC全长序列。还公开了该基因的表达分析方法，显示在肠中表达量最高；通过盐胁迫实验推测该基因在渗透压调节中起重要作用。本发明为研究离子通道在中华绒螯蟹渗透调节中的作用机制提供了理论基础。

公开(公告)号：CN105524932A

公开(公告)日：2016-04-27

申请号：CN201510859994.7

申请日：2015-11-30

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 杨志刚 ,  魏帮鸿 ,  施秋燕 ,  姚琴琴 ,  杨青 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/63 ,  C12N15/10

Abstract: 中华绒螯蟹的delta6去饱和酶基因及其克隆方法，该方法包括步骤：(1)根据Genebank中华绒螯蟹和菁夜蛾的delta6去饱和酶基因进行对比，获得保守序列，设计保守区序列引物FAD6-F1(+)/FAD6-R1(-)，以中华绒螯蟹肝胰腺总RNA反转录合成的cDNA第一链为模板，进行PCR反应，获得delta6去饱和酶基因片段核心片段，将核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据获得的delta6去饱和酶基因核心片段设计5’-和3’-RACE引物，FAD6-5’(-)和FAD6-3’(+)，以中华绒螯蟹肝胰腺总RNA反转录合成的5’-cDNA和3’-cDNA为模板，进行RACE反应，获得5’和3’末端片段，将得到的该片段分别连接至载体后克隆并测序；(3)将5’和3’末端片段分别与获得的delta6去饱和酶基因核心片段进行拼接得到delta6去饱和酶基因全长序列。