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公开(公告)号：CN105907716A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610296462.1
申请日：2016-05-06
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/079
CPC classification number: C12N5/0622
Abstract: 本发明涉及细胞生物学领域，公开了一种从成年猕猴周围神经中分离、纯化雪旺细胞的方法，包括下述步骤：第一步，神经的获取及体外预变性：无菌情况下取成年猕猴腓肠和腓总神经段，去除神经外膜，采用含有复合因子的SCCM预变培养基培养获得成年猕猴腓肠神经；第二步，细胞的原代培养：NB4和dispase混合消化神经，离心后，重悬于含有SCCM的laminin的培养皿中，孵育；第三步，雪旺细胞的纯化：将细胞孵育后，加入dispase消化后收集细胞悬液，在含有Ara?C纯化培养液进行孵育；然后纯化、离心后种植在含有SCCM的生长培养基中。预变性时加入细胞增殖因子提高细胞产量，缩短纯化时间，获得高纯度的成年动物雪旺细胞。
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公开(公告)号：CN105013015A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410157219.2
申请日：2014-04-20
Applicant: 上海市第一人民医院
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及组织工程学修复神经缺损的方法，具体涉及一种采用脂肪来源的许旺细胞修复人工周围神经缺损的方法及其应用。本发明利用从废弃的脂肪组织中获得的许旺细胞修复损伤的神经以及应用大量脂肪来源的许旺细胞和少量的脂肪干细胞共同修复神经缺损，经动物实验证实，能有效的促进损伤神经的再生。本方法提供了一种组织工程学中修复神经缺损的新方法，为损伤神经的修复提供了一种更优质的治疗参考方法。具有临床应用前景和临床价值。
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公开(公告)号：CN102021144A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN200910195922.1
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/08
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种快速充分获得脐带间充质干细胞的方法。本发明将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；随后用胶原酶NB4和透明质酸酶消化脐带碎块，并在乙二胺四乙酸磷酸盐溶液中置于摇床振荡；用100-200目滤网过滤，收集滤过液；最后以600g离心5-10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2-3次，即获得脐带间充质干细胞。本发明可以在短时间内获得大量脐带间充质干细胞。且经过实验证实，获得的脐带干细胞表达干细胞的特异性标记，能够向脂肪、骨、软骨等诱导分化。
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公开(公告)号：CN102191220B
公开(公告)日：2013-09-11
申请号：CN201010124579.4
申请日：2010-03-12
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/079
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种从利用脂肪组织分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。该方法步骤包括：(1)无菌情况下剥离脂肪组织，切碎并清洗；(2)用3-20倍组织量的消化酶溶液消化脂肪组织碎块；所述的消化酶是酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液；(3)将得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟；(4)对解离的细胞在600-1500g离心3-10分钟，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液重悬步骤(4)得到的细胞接种于纤维粘连蛋白包被的培养皿。许旺细胞的纯度就可以接近95％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的优质许旺细胞。
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公开(公告)号：CN109957541A
公开(公告)日：2019-07-02
申请号：CN201711412252.5
申请日：2017-12-23
Applicant: 上海市第一人民医院
Abstract: 本发明属于生物学领域/组织工程，涉及一种组织工程神经种子细胞的构建方法及用途。本发明利用Dispase II分离纯化许旺细胞以及成纤维细胞，将构建的种子细胞用于构建组织工程神经，置入神经导管复合成神经移植物，进一步用于神经缺损的修复，本发明提供了一种获取相对简单，效果良好的种子细胞的方法，外周神经成纤维细胞取材容易，体外扩增能力强，与许旺细胞联合使用移植后具有良好的促进神经再生的效果，并且明显减少的许旺细胞的用量；修复后再生的神经直径较粗，无神经瘤形成；本方法尤其适用于组织工程神经生物材料中添加的种子细胞，具有应用前景和市场价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102191216A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201010123962.8
申请日：2010-03-11
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种诱导人脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞的方法。其包括步骤为：(1)将脐带间充质干细胞培养至亚融合状态后，弃去旧的培养液，加入含有1mM β-巯基乙醇培养液诱导过夜；(2)弃去诱导液，用DMEM培养基清洗，加入全反式维甲酸诱导60-84小时；(3)弃去诱导液，用DMEM培养基清洗，加入含有5ng/ml-6ng/ml血小板源生长因子、9-10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、13μM-15μM福司柯林以及250-260ng/ml胶质细胞生长因子或200-210ng/ml神经生长因子的复合诱导液，诱导10-16天，每72小时换一次液。本发明的方法诱导率可达到90％以上。
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公开(公告)号：CN105013015B
公开(公告)日：2018-04-24
申请号：CN201410157219.2
申请日：2014-04-20
Applicant: 上海市第一人民医院
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及组织工程学修复神经缺损的方法，具体涉及一种采用脂肪来源的许旺细胞修复人工周围神经缺损的方法及其应用。本发明利用从废弃的脂肪组织中获得的许旺细胞修复损伤的神经以及应用大量脂肪来源的许旺细胞和少量的脂肪干细胞共同修复神经缺损，经动物实验证实，能有效的促进损伤神经的再生。本方法提供了一种组织工程学中修复神经缺损的新方法，为损伤神经的修复提供了一种更优质的治疗参考方法。具有临床应用前景和临床价值。
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公开(公告)号：CN102021140B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN200910195923.6
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。
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公开(公告)号：CN102191217A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201010124593.4
申请日：2010-03-12
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种诱导脐带间充质干细胞分化为类神经细胞的方法。该方法将脐带间充质干细胞与许旺细胞用0.4μm孔径的Transwell小室隔离共培养，所用培养液为许旺细胞培养液；每三天全量或者半量换一次液，培养两周即可得到类神经细胞。本发明应用隔离共培养的方法，复合胶原酶和透明质酸酶混合后消化脐带可以大量分离脐带间充质细胞，经传代至第3代就可以获得高纯度的间充质干细胞。使脐带间充质干细胞诱导分化为了神经细胞，细胞分化率达到70％以上。其细胞表达NF-200，nestin，β-III-tubulin等神经细胞特异性标记率达到70～80％。
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公开(公告)号：CN102899290A
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201110216913.3
申请日：2011-07-29
Applicant: 上海市第一人民医院
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法。本发明还包括经过纯化过程获得更高的纯度的许旺细胞的方法。获得的许旺细胞纯度达到91％，再纯化后其纯度高达98％，结果表明，由于体外的预变性促进了许旺细胞的增殖从而抑制了成纤维的增值，能获得有较高的纯度的许旺细胞。本发明方法通过体外预变性的坐骨神经培养及纯化步骤，能简单、有效的获取大量、高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供了丰富、优质的许旺细胞，可用于在组织工程中作为神经种子细胞。
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