公开(公告)号：CN107779442A

公开(公告)日：2018-03-09

申请号：CN201711007097.9

申请日：2017-10-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 黄娟 ,  洪亮 ,  刘卓

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/0053 ,  C12N15/70 ,  C12Y109/03001

Abstract: 本发明涉及一种高纯度全氘代蛋白质的大规模生产方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：构建能够表达目的蛋白的大肠杆菌工程菌，将能够表达目的蛋白的大肠杆菌工程菌在不同氘代率的培养基中培养，获得能够完全适应全氘代培养环境的菌株，将能够完全适应全氘代培养环境的菌株在氘代培养基大规模生长，并表达目的蛋白，对表达的目的蛋白进行纯化，得到全氘代目的蛋白。本发明提供了对全氘代生物大分子蛋白质的制备和纯化方法，一方面对蛋白质、多肽、核酸等这类生物大分子体内细胞培养同位素标记有指导意义，同时氘代生物样品在很多研究方法如核磁共振、中子散射、质谱等方面有重要应用，大规模生产纯化全氘代的生物分子酶具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN106497956A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201610938377.0

申请日：2016-10-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 黄娟 ,  徐沁 ,  洪亮

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/66 ,  C12N9/02

CPC classification number: C12N15/70 ,  C12N9/0077 ,  C12N15/66 ,  C12Y114/15001

Abstract: 本发明涉及CYP101酶重组载体及构建方法、CYP101酶高效表达纯化方法，属于生物技术领域。本发明中构建了PET28a-CYP101的高效表达载体，并将其转化于BL21 plysS菌株中，诱导表达后，利用简单两步纯化方法：即亲和层析和离子交换层析，得到纯度大于95％的高纯酶。与现有技术相比，本发明对CYP101生产简单高效，成本低廉，纯化方便，每升培养基可获得23mg纯度95％以上的目的蛋白。本发明可用于CYP101酶的表达纯化，极大地提高了实验室生产的效率，同时极大的降低了实验成本。对于大规模生产纯化CYP101酶具有很好的应用前景。