公开(公告)号：CN102154516B

公开(公告)日：2013-05-01

申请号：CN201110068834.2

申请日：2011-03-22

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 杨志彪 ,  顾江萍 ,  袁聪俐 ,  崔立 ,  华修国

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 一种生物技术领域的猪传染性胃肠炎病毒S基因荧光定量PCR检测方法及其引物。PCR扩增目的片段，鉴定为阳性的PCR产物，克隆到pMD18-T载体并转化到DH5α感受态细胞，蓝白斑筛选挑取阳性克隆，并进行测序鉴定。提取阳性重组质粒，用紫外分光光度计定量，标准品系列以10倍梯度稀释为终浓度在1.0×103-1.0×1011拷贝/mL，以其作为模板进行荧光定量PCR反应，建立荧光定量PCR标准曲线。提取临床粪便样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR，根据其结果和标准曲线计算样品中病毒的含量。所述的引物序列为序列1和序列2。本发明的优点无需另外设计荧光探针，降低成本，操作简便，检测只需在2小时内即可完成，并且适用任何一款荧光定量PCR仪，可应用于规模大、通量高的样本检测中。

公开(公告)号：CN102154516A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN201110068834.2

申请日：2011-03-22

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 杨志彪 ,  顾江萍 ,  袁聪俐 ,  崔立 ,  华修国

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 一种生物技术领域的猪传染性胃肠炎病毒S基因荧光定量PCR检测方法及其引物。PCR扩增目的片段，鉴定为阳性的PCR产物，克隆到pMD18-T载体并转化到DH5α感受态细胞，蓝白斑筛选挑取阳性克隆，并进行测序鉴定。提取阳性重组质粒，用紫外分光光度计定量，标准品系列以10倍梯度稀释为终浓度在1.0×103-1.0×1011拷贝/mL，以其作为模板进行荧光定量PCR反应，建立荧光定量PCR标准曲线。提取临床粪便样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR，根据其结果和标准曲线计算样品中病毒的含量。所述的引物序列为序列1和序列2。本发明的优点无需另外设计荧光探针，降低成本，操作简便，检测只需在2小时内即可完成，并且适用任何一款荧光定量PCR仪，可应用于规模大、通量高的样本检测中。