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公开(公告)号：CN118910114A
公开(公告)日：2024-11-08
申请号：CN202411157073.1
申请日：2024-08-22
Applicant: 上海交通大学 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
Abstract: 一种木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑的方法，分别构建一个包含Donor片段的自杀质粒和一个包含归巢核酸内切酶(I‑SceI)的诱导质粒，依次电转入木葡糖酸醋杆菌的感受态细胞中，经过两次同源重组获得木葡糖酸醋杆菌基因组无痕编辑突变株。本发明实现了对木葡糖酸醋杆菌基因组无痕的敲除、回补、替换和插入操作，可用于BC稳定高产或性能优良菌株的构建工作、便于在食品等行业的应用。
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公开(公告)号：CN115772507B
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202111050263.X
申请日：2021-09-08
Applicant: 中国科学院天津工业生物技术研究所 , 上海交通大学
Abstract: 一种细胞色素P450酶在合成灵芝三萜中的应用，通过P450酶作为催化剂，反应生成灵芝三萜类化合物，实现其在酿酒酵母中的异源生物合成，即从灵芝基因组中挖掘到两个参与三萜合成的P450基因GL19325和GL15605，并利用合成生物学技术手段，构建酿酒酵母工程菌株，实现相应三萜类化合物的异源生物合成。
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公开(公告)号：CN119799834A
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202311303816.7
申请日：2023-10-10
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种基于改造膜锚定细胞色素P450定向提高活性灵芝酸产量的方法，利用AlphaFold2预测的CYP512W2的结构的基础上，计算辅助设计选择若干关键氨基酸指导P450膜蛋白CYP512W2进行改造并进行酶分子改造。本发明通过改造一个膜锚定的杂泛细胞色素P450酶，提高催化效率和底物选择性的同时，通过细胞色素P450突变蛋白产生较高的赤灵酸Jb或灵芝酸Y产量及赤灵酸Jb/灵芝酸Y或灵芝酸Y/赤灵酸Jb比例。
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公开(公告)号：CN115725633A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202111000127.X
申请日：2021-08-27
Applicant: 上海交通大学 , 中国科学院天津工业生物技术研究所
Abstract: 一种细胞色素P450功能研究及在灵芝三萜合成中的应用，在酿酒酵母细胞中采用双质粒抗生素调控表达系统，通过将GL21117在一个质粒中进行表达调控，以及将GL20421和GL21117两个基因在两个质粒中同时进行表达调控这两种方式，在保证GA‑HLDOA前体产量的同时，获得一类灵芝三萜，包括：3,15‑二羟基‑羊毛甾‑8,24‑二烯‑26‑酸、灵芝酸Y、3,15,30‑三羟基‑羊毛甾‑8,24‑二烯‑26‑酸、7‑氧代‑3,15‑二羟基‑羊毛甾‑8,24‑二烯‑26‑酸和24,25‑二烷基‑3,30‑二羟基‑羊毛甾‑8‑烯基‑26‑酸。
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公开(公告)号：CN113444737B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202010214722.2
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国科学院天津工业生物技术研究所 , 上海交通大学
IPC: C12N15/53 , C12N9/02 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P33/00 , C07J9/00 , C12R1/865 , C12R1/84 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及细胞色素P450酶及其在合成灵芝三萜类化合物中的应用。本发明获得的CYP基因GL20421可催化灵芝酸HLDOA形成一种新的天然灵芝三萜产物‑式(I)所示的灵芝三萜类化合物；本发明获得的CYP基因GL21117可催化灵芝酸HLDOA形成的灵芝酸Jb，其与天然的化合物结构完全一致，具有同等的产品性能和质量。本发明通过将GL20421和GL21117基因在酿酒酵母中异源表达，实现了灵芝三萜类化合物异源生物合成，产率高，具有广泛的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111321154B
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN201811522445.0
申请日：2018-12-13
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种基于高等真菌灵芝功能基因编辑的调节灵芝酸产量的方法，包括一个U6基因启动子(pU6‑3)以及通过结合HDV核酶构建了能内源表达gRNA的CRISPR‑Cas9质粒，该质粒能用于高等真菌标记基因和功能基因的高效编辑，且其编辑效率远高于已报道的编辑效率。基于功能基因cyp5150l8中断的突变体，发现突变体中四种灵芝酸均比野生型的含量降低。本发明开发了一套能广泛用于有效编辑高等真菌的功能基因的CRISPR‑Cas9系统。
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公开(公告)号：CN108929884B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201710391001.7
申请日：2017-05-27
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种采用合成生物学手段异源生物合成灵芝酸的方法，通过挖掘和灵芝三萜生物合成相关的细胞色素P450酶(CYP)基因，并在酿酒酵母细胞异源表达该基因来进行筛选鉴定，并对酵母工程菌株的发酵产物进行分离纯化、质谱和核磁共振等分析，确定其为3‑hydroxy‑lanosta‑8,24‑dien‑26‑oic‑acid(灵芝酸Z)。本发明包含从灵芝三萜生物合成催化元件的挖掘，发酵表型初筛与元件功能鉴定，到最终获得异源生物合成的灵芝三萜类物质等一系列的设计及验证，也为异源生产其它灵芝三萜类活性物质提供了范例。
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公开(公告)号：CN111363753A
公开(公告)日：2020-07-03
申请号：CN201811597099.2
申请日：2018-12-26
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/53 , C12N15/81 , C12P17/02 , C07D303/14 , C07D303/04
Abstract: 一种采用合成生物学手段发现和异源生产线性三萜的方法，在酿酒酵母细胞异源表达灵芝来源的cyp505d13基因，并对酵母工程菌株的发酵产物进行分离纯化、质谱和核磁共振等分析，确定产生了线性三萜类化合物1、化合物2和化合物3，其中化合物1和2从未见报道。本发明包含从cyp505d13基因的发现，到产物生产鉴定，最终获得异源生物合成的线性三萜类物质等一系列的设计及验证，也为异源生产其它线性三萜类活性物质提供了范例。
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公开(公告)号：CN108929884A
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201710391001.7
申请日：2017-05-27
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种采用合成生物学手段异源生物合成灵芝酸的方法，通过挖掘和灵芝三萜生物合成相关的细胞色素P450酶(CYP)基因，并在酿酒酵母细胞异源表达该基因来进行筛选鉴定，并对酵母工程菌株的发酵产物进行分离纯化、质谱和核磁共振等分析，确定其为3-hydroxy-lanosta-8,24-dien-26-oic-acid(灵芝酸Z)。本发明包含从灵芝三萜生物合成催化元件的挖掘，发酵表型初筛与元件功能鉴定，到最终获得异源生物合成的灵芝三萜类物质等一系列的设计及验证，也为异源生产其它灵芝三萜类活性物质提供了范例。
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公开(公告)号：CN107779466A
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201610794735.5
申请日：2016-08-31
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/80 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N1/15
CPC classification number: C12N15/80 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N2310/10 , C12N2800/80
Abstract: 一种用于高等真菌基因中断的方法，通过将含有密码子优化的Cas9基因的表达载体转入单倍体灵芝(Ganoderma lucidum，CGMCC NO.5.26)中，获得了可稳定表达Cas9蛋白的灵芝菌株；然后将经体外转录的gRNA转入此表达Cas9蛋白的灵芝菌株中，通过gRNA识别靶向基因，实现靶向基因的特定位点的中断，并以U6snRNA启动子介导gRNA内源转录，同样使靶向基因的特定位点中断。本发明以灵芝作为模式物种，提供了包含密码子优化的Cas9基因的表达载体和宿主细胞，提供了通过外源转录合成gRNA或内源U6small nuclear RNA(U6 snRNA)启动子转录合成gRNA两种方式构建CRISPR/Cas9基因组编辑的方法。
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