公开(公告)号：CN107779466B

公开(公告)日：2021-01-08

申请号：CN201610794735.5

申请日：2016-08-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 肖晗 ,  秦浩 ,  钟建江

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N1/15

Abstract: 一种用于高等真菌基因中断的方法，通过将含有密码子优化的Cas9基因的表达载体转入单倍体灵芝(Ganoderma lucidum，CGMCC NO.5.26)中，获得了可稳定表达Cas9蛋白的灵芝菌株；然后将经体外转录的gRNA转入此表达Cas9蛋白的灵芝菌株中，通过gRNA识别靶向基因，实现靶向基因的特定位点的中断，并以U6snRNA启动子介导gRNA内源转录，同样使靶向基因的特定位点中断。本发明以灵芝作为模式物种，提供了包含密码子优化的Cas9基因的表达载体和宿主细胞，提供了通过外源转录合成gRNA或内源U6small nuclear RNA(U6 snRNA)启动子转录合成gRNA两种方式构建CRISPR/Cas9基因组编辑的方法。

公开(公告)号：CN107779466A

公开(公告)日：2018-03-09

申请号：CN201610794735.5

申请日：2016-08-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 肖晗 ,  秦浩 ,  钟建江

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N1/15

CPC classification number: C12N15/80 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C12N2800/80

Abstract: 一种用于高等真菌基因中断的方法，通过将含有密码子优化的Cas9基因的表达载体转入单倍体灵芝(Ganoderma lucidum，CGMCC NO.5.26)中，获得了可稳定表达Cas9蛋白的灵芝菌株；然后将经体外转录的gRNA转入此表达Cas9蛋白的灵芝菌株中，通过gRNA识别靶向基因，实现靶向基因的特定位点的中断，并以U6snRNA启动子介导gRNA内源转录，同样使靶向基因的特定位点中断。本发明以灵芝作为模式物种，提供了包含密码子优化的Cas9基因的表达载体和宿主细胞，提供了通过外源转录合成gRNA或内源U6small nuclear RNA(U6 snRNA)启动子转录合成gRNA两种方式构建CRISPR/Cas9基因组编辑的方法。