公开(公告)号：CN112904017B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN202110069353.7

申请日：2021-01-19

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 陶生策 ,  江何伟 ,  郑云萧 ,  陈红 ,  王雪宁

IPC: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测系统及其鉴定或验证方法，所述检测系统包括：a)链霉亲和素‑短肽四聚体；b)PafA酶；c)生物素修饰的已知分子。本发明采用生物素标记已知分子，已知分子与蛋白质发生相互作用后，通过链霉亲和素‑短肽四聚体在温和的条件下高效地捕获已知分子的相互作用蛋白质，再在PafA酶的催化下，将短肽与已知分子的相互作蛋白质共价连接，从而将相互作用的已知分子与蛋白质之间的非共价结合转换为链霉亲和素与蛋白质之间的共价连接，从而进行分析，分离和鉴定。本方法可以在保持已知分子天然结构的基础上，实现弱相互作用和瞬时相互作用的捕获，可以用于已知分子与相互作用蛋白质的验证和发现。

公开(公告)号：CN112904017A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110069353.7

申请日：2021-01-19

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 陶生策 ,  江何伟 ,  郑云萧 ,  陈红 ,  王雪宁

IPC: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种基于共价连接的已知分子与蛋白质相互作用检测系统及其鉴定或验证方法，所述检测系统包括：a)链霉亲和素‑短肽四聚体；b)PafA酶；c)生物素修饰的已知分子。本发明采用生物素标记已知分子，已知分子与蛋白质发生相互作用后，通过链霉亲和素‑短肽四聚体在温和的条件下高效地捕获已知分子的相互作用蛋白质，再在PafA酶的催化下，将短肽与已知分子的相互作蛋白质共价连接，从而将相互作用的已知分子与蛋白质之间的非共价结合转换为链霉亲和素与蛋白质之间的共价连接，从而进行分析，分离和鉴定。本方法可以在保持已知分子天然结构的基础上，实现弱相互作用和瞬时相互作用的捕获，可以用于已知分子与相互作用蛋白质的验证和发现。