一种基于CRISPR/RfxCas13d系统的特异性敲低植物circRNA的方法

    公开(公告)号:CN117511942A

    公开(公告)日:2024-02-06

    申请号:CN202311463065.5

    申请日:2023-11-06

    Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/RfxCas13d系统的特异性敲低植物circRNA的方法,包括以下步骤:S1、设计并合成植物密码子偏好性的编码RfxCas13d的目的基因序列,构建pCAMBIA1300‑RfxCas13d重组载体;S2、合成AtU6‑crRNA基因片段,所述AtU6‑crRNA基因片段包含两个BsaI酶切位点,构建pENTR4:gRNA4‑AtU6‑crRNA重组载体;S3、合成构建特异性靶向植物circRNA BSJ位点的pCAMBIA1300‑RfxCas13d‑BSJ‑crRNA载体;S4、将构建好的pCAMBIA1300‑RfxCas13d‑BSJ‑crRNA表达载体介导转入植物愈伤组织,通过组织培养获得特异性敲低植物circRNA的转基因植株;本发明极大的加快植物circRNA的功能研究,进而实现植物育种中circRNA功能增益突变体和新种质的开发。

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