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公开(公告)号：CN108103039B
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN201611051529.1
申请日：2016-11-25
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一组岩藻糖基转移酶突变体及其筛选方法和应用。本发明通过针对岩藻糖基转移酶的荧光底物设计，结合流式细胞荧光分选的高通量筛选方法，获得了一组催化活力明显提高的岩藻糖基转移酶突变体。本发明还涉及了岩藻糖基转移酶突变体在岩藻糖基化寡糖及其糖缀合物合成中的应用。
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公开(公告)号：CN104293843B
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201410508221.X
申请日：2014-09-28
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法。首先，本发明对于鞘脂神经酰胺N‑去酰基化酶SCDase G8进行了改造，去除了N末端信号肽并截短了C末端，得到了高活力的SCDase G8的突变体SCDase G8‑del，并针对宿主细胞对编码基因进行了密码子优化；通过蛋白表达条件的优化，提高了SCDase G8‑del的可溶性表达量。在此基础上建立了一种利用SCDase G8‑del高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法。该方法优化了高活力的SCDase G8‑del的可溶性表达条件，优化了反应体系中金属离子浓度，优化了表面活性剂的种类和浓度，提高了溶血鞘脂产率，并且优化后的反应体系对高浓度的鞘脂和不同种类的鞘脂都有较好的水解作用。
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公开(公告)号：CN105218583B
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201510573534.8
申请日：2015-09-10
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明属于酶工程领域，公开了一种基于羧基香豆素的磷酸三酯酶荧光底物，以及基于该底物的磷酸三酯酶的高通量筛选方法。该方法为磷酸三酯酶的体外区室化-荧光激活细胞分选超高通量筛选技术。本发明基于羧基香豆素的磷酸三酯酶底物，反应后的荧光产物具有非常好的液滴保留性，在进行酶活性定量与筛选中具有灵敏度高、定量准确的优点。底物和反应产物之间亲水性的差异，使底物可以加入外水相中并通透油相进行酶反应；生成的产物由于亲水性提高而保留在液滴中，从而实现“液滴荧光捕获”的效应，准确地控制反应时间、降低荧光背景干扰、提高筛选准确性。
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公开(公告)号：CN102796714A
公开(公告)日：2012-11-28
申请号：CN201210015196.2
申请日：2012-01-18
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N9/16 , C12N15/55 , C12N1/21 , A62D3/02 , C12R1/19 , A62D101/04 , A62D101/28
Abstract: 本发明提供了一种磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用。本发明由来源于嗜热细菌的Geobacillus kaustophilus HTA426的磷酸三酯酶基因出发，利用易错PCR的方法，经过多轮的突变和筛选，最终获得一个磷酸三酯酶活力显著提高的突变体，在该突变体的氨基酸序列中涉及到的突变为：Phe28Ile、Tyr99Leu、Thr171Ser、Phe228Leu、Asn269Ser、Val270Gly、Trp271Cys、Gly273Asp。突变体对于几种常见的有机磷杀虫剂的比活力相比野生型得到了显著提高，在有机磷毒物的生物降解领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102660517A
公开(公告)日：2012-09-12
申请号：CN201110406922.9
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂肪酶突变体具有SEQ ID No：2、SEQ ID No：3或SEQ ID No：4所示的氨基酸残基序列，SEQ ID No：2、SEQ ID No：3和SEQ ID No：4均由317个氨基酸组成。本发明运用半理性设计的方法，对南极假丝酵母脂肪酶B基因进行多轮定点饱和突变，获取脂肪酶突变体，这些突变体包含氨基酸突变D223G、L278M及它们的组合。以各自的T5015及48℃的半衰期t1/2来表示，脂肪酶突变体的热稳定性得到了提高。具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108498523B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN201710102185.0
申请日：2017-02-24
Applicant: 上海交通大学
IPC: A61K31/7028 , A61P25/00 , C12P19/44
Abstract: 本发明涉及到一组含有不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物在促进神经突起生长中的应用。通过鞘脂神经酰胺N‑去酰基化酶酶法合成带有不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物库，结合经典的促神经突起生长的细胞模型，发现带有不饱和脂肪酸链的神经节苷脂衍生物具有显著提高的促神经突起生长的生物学活性，且神经节苷脂鞘氨醇碱基的碳链数量的不同也对其促神经突起生长的生物学活性有显著影响。
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公开(公告)号：CN115896213A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211274914.8
申请日：2022-10-18
Applicant: 上海绅道生物科技有限公司 , 上海交通大学
IPC: C12P19/34 , C12Q1/6804
Abstract: 本发明公开了一种实时监测体外转录合成RNA的检测方法，属于分子生物学和转录技术领域。本发明开发了适用于体外转录的DNA模板、实时荧光转录体系，并建立一个高通量、简单、灵敏的RNA合成监测和量化系统。本发明的DNA模板/实时荧光转录体系/监测体系可以应用于合成mRNA疫苗、筛选RNA聚合酶、分析启动子强度、筛选抑制转录的药物、mRNA药物生产工艺优化，mRNA药物序列AI设计软件训练等，以及体外转录体系的优化、RNA聚合酶活性的量化、序列的优化。
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公开(公告)号：CN108251403B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201611240468.3
申请日：2016-12-29
Applicant: 上海交通大学 , 开平牵牛生化制药有限公司
Abstract: 本发明涉及了一种可实现鞘糖脂内切糖苷酶EGCase I工程化表达的方法，可以有效地将EGCase I可溶性地表达，并保持有优秀的水解以及转糖苷活性；并在此基础上，进一步开发出了一种新型的EGCase I突变酶，既具有较宽的底物谱，又兼具糖苷合成酶活性；所获得的鞘糖脂内切糖苷酶非常适合应用于工业化鞘糖脂的分析与合成中。
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公开(公告)号：CN108251394B
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN201611240470.0
申请日：2016-12-29
Applicant: 上海交通大学 , 开平牵牛生化制药有限公司
Abstract: 本发明涉及一种鞘糖脂内切糖苷酶，所述糖苷酶不仅显著提高了水解活性，还进一步拓宽了底物范围；在相应被改造的糖苷合成酶的基础上，也显著提高了合成酶的活性。本发明还涉及到一种鞘糖脂内切糖苷酶在鞘糖脂或寡糖制备、分析以及生产中的应用。
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公开(公告)号：CN106085975B
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201610428122.X
申请日：2016-06-16
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围以内的高柔性残基为靶标位点，通过突变筛选，获得酶热动力学稳定性提高的突变体。在该策略的指导下，显著提高了结构高度复杂的褶皱假丝酵母脂肪酶1的热稳定性。结合结构上最小蛋白(LipA)和中度复杂的蛋白(CalB)的稳定性变化结果，发现距离催化残基附近的高B‑factor残基的突可以显著提高酶突变的成功率。同时，借助突变体结构‑功能关系的系统分析将为深入研究酶区域稳定化规律、发展酶稳定化技术奠定了基础。
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