公开(公告)号：CN112175905A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202011061166.6

申请日：2020-09-30

Applicant: 上海中医药大学

Inventor： 朱诗国 ,  姚超 ,  于文霞

IPC: C12N5/0783 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种高效敲除NK细胞中CD96基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～10所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中CD96基因的敲除，不仅敲除效率较高，而且所获得的不表达CD96的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。

公开(公告)号：CN112126661A

公开(公告)日：2020-12-25

申请号：CN202011056575.7

申请日：2020-09-30

Applicant: 上海中医药大学

Inventor： 朱诗国 ,  姚超 ,  于文霞

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种高效敲除NK细胞中TIGIT基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～4所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中TIGIT基因的敲除效率接近80％，不仅敲除效率高，而且所获得的不表达TIGIT的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。

公开(公告)号：CN112175905B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202011061166.6

申请日：2020-09-30

Applicant: 上海中医药大学

Inventor： 朱诗国 ,  姚超 ,  于文霞

IPC: C12N5/0783 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种高效敲除NK细胞中CD96基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～10所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中CD96基因的敲除，不仅敲除效率较高，而且所获得的不表达CD96的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。

公开(公告)号：CN112126661B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202011056575.7

申请日：2020-09-30

Applicant: 上海中医药大学

Inventor： 朱诗国 ,  姚超 ,  于文霞

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种高效敲除NK细胞中TIGIT基因的方法，所述方法是利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，以电穿孔转染方式将sgRNA与Cas9蛋白的复合物导入经扩增的NK细胞中，其中：sgRNA的序列选自SEQ ID NO.1～4所示序列中的任意一种。采用本发明所述方法可实现对NK细胞中TIGIT基因的敲除效率接近80％，不仅敲除效率高，而且所获得的不表达TIGIT的NK细胞可解除CD155+肿瘤细胞对NK细胞的免疫抑制作用，相对于野生型NK细胞，在体内、体外实验中均展现出更强的抗肿瘤活性，明显提高了NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤活性，可望开发成安全有效的抗肿瘤生物制剂。