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公开(公告)号:CN116814519B
公开(公告)日:2023-11-17
申请号:CN202311091228.1
申请日:2023-08-29
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种利用蔗糖生产肌醇的大肠杆菌工程菌株、及其构建方法和应用。本发明通过在大肠杆菌中过表达内源和外源的肌醇合成关键酶基因,建立肌醇合成途径;敲除葡萄糖‑6‑磷酸异构酶基因和葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因,阻断竞争途径,增加肌醇合成途径碳通量供给;过表达葡萄糖转运和代谢的关键酶基因,提高葡萄糖利用能力,提高肌醇转化率;过表达蔗糖转运、分解和代谢的关键酶基因,在大肠杆菌中建立蔗糖代谢途径,平衡细胞生长和肌醇合成间碳流量的分配,实现蔗糖到肌醇的高效生产。在优化的高密度发酵条件下,利用以蔗糖为碳源的发酵培养基生产肌醇,肌醇的最高产量达到166.4 g/L。
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公开(公告)号:CN116334048A
公开(公告)日:2023-06-27
申请号:CN202310177937.5
申请日:2023-02-28
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及一种最适温度、热稳定性和自降解抗性提高的碱性蛋白酶突变体ThAPT3‑M10及应用。本发明以碱性蛋白酶ThAPT3‑M9为亲本,在表面loop区域的以定点突变的方法引入三个突变位点,突变体ThAPT3‑M10的最适温度从65℃提高到了70℃。Tm值与亲本相比提高了3℃,60℃下的t1/2从62.4min提高到了111.8min(≈1.8倍)。此外,ThAPT3‑M10在70℃下的自降解现象较亲本相比有了明显的改善。因此,本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于亲本有着更好的热稳定性和自降解抗性,具有更好的工业应用前景。
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公开(公告)号:CN116286941A
公开(公告)日:2023-06-23
申请号:CN202310574853.5
申请日:2023-05-22
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及基因编辑领域,具体涉及一种毕赤酵母基因编辑单一质粒及改进的基因编辑方法。根据本申请的技术方案,在构建基因编辑质粒时只需两轮PCR和一次无缝重组即可完成基因编辑质粒的构建,第一轮PCR用于扩增左右同源序列、第二轮PCR用于将左右同源序列进行融合。在删除基因时,只需转入单一的基因编辑质粒即可。完成基因编辑后,将阳性转化子接入含有鼠李糖的培养基中培养,通过鼠李糖诱导启动子调控毒性蛋白MazF表达,即可快速消除细胞中质粒pPICC02及其衍生体;相对于现有的在无选择压力下多次传代来消除质粒的策略,此法快速简洁。基于本申请的基因编辑质粒的基因编辑方法可实现基因快速高效编辑,有很好的应用潜力。
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公开(公告)号:CN116286748A
公开(公告)日:2023-06-23
申请号:CN202310031075.5
申请日:2023-01-10
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体地,本发明涉及具有高比活力的耐热α‑淀粉酶突变体及其基因和应用。本发明通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的突变体α‑淀粉酶K152H/A166C/E168H(M1)进行A262D单点突变,从而获得所述α‑淀粉酶的突变体。本发明的α‑淀粉酶突变体与α‑淀粉酶M1相比,比活力大幅提升,且最适温度不变,为95℃。
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公开(公告)号:CN116218822A
公开(公告)日:2023-06-06
申请号:CN202310199724.2
申请日:2023-03-05
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地,涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M5和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本,获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体ThAPT3‑M5。亲本PA3的Tm值为68.2±0.3℃,而突变体的Tm值提高到了69.5±0.2℃。突变体在55℃和60℃下的t1/2分别提高到亲本的2.3倍和2.8倍。在60℃下处理10min后,亲本剩余酶活为1.9%,而突变体M5的剩余酶活为34.9%。此外,突变体的比活力从最初的3078.3±82.5U/mg提高到了3701.9±42.5U/mg。因此,本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性,具有更好的工业应用前景。
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公开(公告)号:CN116121227A
公开(公告)日:2023-05-16
申请号:CN202310031125.X
申请日:2023-01-10
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及β‑1,3‑葡聚糖酶突变体N54W及其基因和应用。所述β‑1,3‑葡聚糖酶N54W突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的β‑1,3‑葡聚糖酶突变体与野生型β‑1,3‑葡聚糖酶相比,β‑1,3‑葡聚糖酶的比活提高3.6倍,达到902.1U/mg,催化活性大幅提高,kcat/Km达到888.9ml·mg‑1·min‑1,达到野生型5.5倍。本发明提供了上述具有高比活性的β‑1,3‑葡聚糖酶突变体的应用,具体可以应用于酿造、食品和饲料领域中,有着非常广阔的应用前景。
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公开(公告)号:CN113699127B
公开(公告)日:2023-03-21
申请号:CN202110898384.3
申请日:2021-08-05
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及一种提高染料脱色过氧化物酶降解霉菌毒素效率的方法。本发明提供了两种可用于霉菌毒素玉米赤霉烯酮降解的高效染料脱色过氧化酶介体。本发明的介体能够协助链霉菌来源染料脱色过氧化物酶有效地降解霉菌毒素玉米赤霉烯酮,广泛用于食品和饲料霉菌毒素脱毒领域。
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公开(公告)号:CN115627279A
公开(公告)日:2023-01-20
申请号:CN202211594542.7
申请日:2022-12-13
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12P7/58
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及绿原酸作为裂解性多糖单加氧酶降解纤维素的电子供体的应用。木质纤维素类生物质中天然存在的化合物能作为裂解性多糖单加氧酶电子供体,显著降低裂解性多糖单加氧酶的使用成本,促进其大规模地推广应用。
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公开(公告)号:CN115612704A
公开(公告)日:2023-01-17
申请号:CN202211632025.4
申请日:2022-12-19
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12P19/00
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及原儿茶酸作为裂解性多糖单加氧酶降解纤维素的电子供体的应用。木质纤维素类生物质中天然存在的化合物能作为裂解性多糖单加氧酶电子供体,显著降低裂解性多糖单加氧酶的使用成本,促进其大规模地推广应用。
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公开(公告)号:CN114685632B
公开(公告)日:2022-12-16
申请号:CN202210563760.8
申请日:2022-05-23
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及转录抑制因子121121的应用及提高里氏木霉纤维素酶表达量和酶活的方法。本发明的纤维素酶表达相关的转录抑制因子121121对于纤维素酶活性表达具有调节作用,通过构建该基因的敲除质粒,并用其转化宿主菌,在宿主菌中敲除转录抑制因子121121的表达可提高宿主菌的蛋白表达量和纤维素酶酶活。本发明丰富了里氏木霉纤维素酶的转录调控网络,为提高纤维素酶产量,降低纤维素酶成本,实现纤维素有效利用提高了新途径。
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