公开(公告)号：CN116814593A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202310199723.8

申请日：2023-03-05

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

Inventor： 秦星 ,  王宵 ,  罗会颖 ,  姚斌 ,  王亚茹 ,  黄火清 ,  柏映国 ,  苏小运 ,  王苑 ,  涂涛 ,  张杰 ,  王晓璐 ,  张红莲 ,  于会民

IPC: C12N9/58 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 发明涉及基因工程和蛋白质工程领域，具体涉及一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M6、7、8、9和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，分别将loop18区域优化后的突变体ThAPT3‑M2、α8‑helix区域优化后的突变体ThAPT3‑M4和loop19区域优化后的突变体ThAPT3‑M5分别进行双区域叠加和三区域叠加，产生了四个突变体。突变体的Tm值提高了7.2℃、4.3℃、5.7℃、7.5℃，55℃下的t1/2分别提高到亲本的10.6倍、6.9倍、8.5倍、12.2倍，60℃下的t1/2分别提高到亲本的21.2倍、13.2倍、17.6倍、39.7倍。突变体M6、M7、M8和M9的比活力相较于亲本分别提高了23％、25％、20％和62％。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN116218821A

公开(公告)日：2023-06-06

申请号：CN202310199721.9

申请日：2023-03-05

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

Inventor： 罗会颖 ,  王宵 ,  秦星 ,  姚斌 ,  王亚茹 ,  黄火清 ,  柏映国 ,  苏小运 ,  王苑 ,  涂涛 ,  张杰 ,  王晓璐 ,  张红莲 ,  于会民

IPC: C12N9/58 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地，涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M1、ThAPT3‑M2和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，通过区段替换和定点突变，从而获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体。亲本PA3在60℃条件下处理10min和20min后，剩余酶活分别为1.9％和1.6％。突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理10min后，剩余酶活分别为62％和69％；突变体ThAPT3‑M1和ThAPT3‑M2在60℃下处理20min后，剩余酶活分别为39％和43％。此外，突变体ThAPT3‑M2的比活力提高了25％。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN116064490A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202310199722.3

申请日：2023-03-05

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

Inventor： 罗会颖 ,  王宵 ,  秦星 ,  姚斌 ,  王亚茹 ,  黄火清 ,  柏映国 ,  苏小运 ,  王苑 ,  涂涛 ,  张杰 ,  王晓璐 ,  张红莲 ,  于会民

IPC: C12N9/58 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M3、ThAPT3‑M4和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，通过定点突变，从而获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体。亲本PA3在60℃条件下处理10min和20min后，剩余酶活分别为1.9％和1.6％。突变体ThAPT3‑M3和ThAPT3‑M4在60℃下处理10min后，剩余酶活分别为58％和68％；突变体ThAPT3‑M3和ThAPT3‑M4在60℃下处理20min后，剩余酶活分别为31％和45％。此外，突变体ThAPT3‑M4的比活力提高了25％。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN116334048A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310177937.5

申请日：2023-02-28

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

Inventor： 罗会颖 ,  王宵 ,  秦星 ,  王晓路 ,  黄火清 ,  涂涛 ,  苏小运 ,  张杰 ,  柏映国 ,  王苑 ,  张红莲 ,  田健 ,  王亚茹 ,  于会民 ,  姚斌

IPC: C12N9/50 ,  C12N15/57 ,  C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P13/22 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种最适温度、热稳定性和自降解抗性提高的碱性蛋白酶突变体ThAPT3‑M10及应用。本发明以碱性蛋白酶ThAPT3‑M9为亲本，在表面loop区域的以定点突变的方法引入三个突变位点，突变体ThAPT3‑M10的最适温度从65℃提高到了70℃。Tm值与亲本相比提高了3℃，60℃下的t1/2从62.4min提高到了111.8min(≈1.8倍)。此外，ThAPT3‑M10在70℃下的自降解现象较亲本相比有了明显的改善。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于亲本有着更好的热稳定性和自降解抗性，具有更好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN116218822A

公开(公告)日：2023-06-06

申请号：CN202310199724.2

申请日：2023-03-05

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

Inventor： 张红莲 ,  王宵 ,  罗会颖 ,  秦星 ,  姚斌 ,  王亚茹 ,  黄火清 ,  柏映国 ,  苏小运 ,  王苑 ,  涂涛 ,  张杰 ,  王晓璐 ,  于会民

IPC: C12N9/58 ,  C12N15/57 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及基因工程和蛋白质工程领域。具体地，涉及到一种提高碱性蛋白酶热稳定性的方法及突变体ThAPT3‑M5和应用。本发明以碱性蛋白酶PA3为亲本，获得了热稳定性显著提高的蛋白酶突变体ThAPT3‑M5。亲本PA3的Tm值为68.2±0.3℃，而突变体的Tm值提高到了69.5±0.2℃。突变体在55℃和60℃下的t1/2分别提高到亲本的2.3倍和2.8倍。在60℃下处理10min后，亲本剩余酶活为1.9％，而突变体M5的剩余酶活为34.9％。此外，突变体的比活力从最初的3078.3±82.5U/mg提高到了3701.9±42.5U/mg。因此，本发明提供的碱性蛋白酶突变体相较于野生型有着更好的热稳定性和催化活性，具有更好的工业应用前景。