一种基于CRISPR-Cas12a系统的地衣芽孢杆菌基因组编辑载体

    公开(公告)号:CN118109492A

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202410206644.X

    申请日:2024-02-26

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明属于基因技术领域,公开了一种地衣芽胞杆菌基因组编辑载体,包括PN2启动子介导的crRNA表达盒,以及Pmal启动子介导的Cas12a(Cpf1)表达盒,同源修复序列均位于同一载体质粒中。重组的载体质粒进入地衣芽孢杆菌细胞后,Cas12a(Cpf1)在麦芽糖诱导下表达,并在crRNA引导下识别并剪切PAM(5’‑TTTV)序列,只有发生同源修复的转化子才得以存活下来,从而完成了目的基因敲除或插入。本发明所构建的CRISPR‑Cas12a(Cpf1)系统针对同一位点的敲除效率均为100%,与现有地衣芽孢杆菌基因组编辑系统相比,更加高效,更加便捷。

    一种启动子及促进地衣芽孢杆菌产海藻糖生产用酶的应用

    公开(公告)号:CN114621955A

    公开(公告)日:2022-06-14

    申请号:CN202210327095.2

    申请日:2022-03-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种启动子及促进地衣芽孢杆菌产海藻糖生产用酶的应用,属于发酵工程领域。本发明通过人工改造PP2启动子调控区域,构建了一个活性提高的启动子1upPP2,并利用该启动子在地衣芽孢杆菌中分别表达麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶,使酶活分别提高了37%和10%。本发明还通过优化发酵培养基,使携带1upPP2的重组菌麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶的酶活分别达到2572.5U/mL、358.0U/mL。本发明构建的启动子简单高效,对提高地衣芽孢杆菌表达系统表达水平有实际意义。

    一种具有群体感应特征的启动子及其应用

    公开(公告)号:CN113817736A

    公开(公告)日:2021-12-21

    申请号:CN202111192261.4

    申请日:2021-10-13

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种具有群体感应特征的启动子及其应用,具有与SEQ ID NO.1所示的序列同源性≥95%的核酸序列,本发明提供的启动子Ptr1来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis BL2)。本发明所述启动子具有前期(1‑5h)表达极弱,后期(16‑48h)表达脉冲型增长的特性,是响应群体密度的自诱导高效表达系统。本发明提供的启动子确保细菌种群达到一定数量后才产生目标产物,无需添加诱导剂,保证了细胞在“生长”与“生产”两相之间进行适时的转变。

    一种新型组成型启动子、重组地衣芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN112795569A

    公开(公告)日:2021-05-14

    申请号:CN202110200998.X

    申请日:2021-02-23

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 发明公开了一种新型组成型启动子、重组地衣芽孢杆菌及其应用,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR获得Bacillus licheniformis来源的强组成型启动子P2以及Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶目的基因,构建重组质粒pHY‑P2‑tfa,并转化至地衣芽抱杆菌Bacillus licheniformis,得到重组地衣芽抱杆菌。本发明以食品安全的地衣芽孢杆菌为表达宿主,利用新型高活性启动子P2实现麦芽三糖淀粉酶的重组表达。混合碳源麦芽糊精60g/L,葡萄糖10g/L以及42℃的发酵条件更有利于产酶,重组菌发酵的最高酶活达到578.47U/mL。

Patent Agency Ranking