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公开(公告)号:CN118109492A
公开(公告)日:2024-05-31
申请号:CN202410206644.X
申请日:2024-02-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明属于基因技术领域,公开了一种地衣芽胞杆菌基因组编辑载体,包括PN2启动子介导的crRNA表达盒,以及Pmal启动子介导的Cas12a(Cpf1)表达盒,同源修复序列均位于同一载体质粒中。重组的载体质粒进入地衣芽孢杆菌细胞后,Cas12a(Cpf1)在麦芽糖诱导下表达,并在crRNA引导下识别并剪切PAM(5’‑TTTV)序列,只有发生同源修复的转化子才得以存活下来,从而完成了目的基因敲除或插入。本发明所构建的CRISPR‑Cas12a(Cpf1)系统针对同一位点的敲除效率均为100%,与现有地衣芽孢杆菌基因组编辑系统相比,更加高效,更加便捷。
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公开(公告)号:CN117965410A
公开(公告)日:2024-05-03
申请号:CN202410022250.9
申请日:2024-01-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPRi的动态调控地衣芽孢杆菌发酵生产L‑缬氨酸的方法,属于代谢工程领域。本发明构建基于条件表达的CRISPRi系统,通过设计三个不同的靶点靶向全局转录因子CodY,得到具有不同CodY转录水平的重组菌株,它们在不同程度上抑制了碳源流向溢出代谢产物2,3‑丁二醇和乙酸,促进碳源流向L‑缬氨酸一侧,同时部分解除CodY原本对L‑缬氨酸的合成抑制。本发明构建的菌株sgRNA‑CodY‑G3在37℃条件下发酵72h后,L‑缬氨酸产量达到了0.31g/L,是对照菌株的2.55倍;糖酸转化率达到了0.31%,较对照菌株提升了2.47倍。
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公开(公告)号:CN115948444A
公开(公告)日:2023-04-11
申请号:CN202211294342.X
申请日:2022-10-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用硝酸盐和全局厌氧调节因子Fnr提高地衣芽孢杆菌厌氧活性的方法,属于发酵工程领域。本发明通过向发酵培养基中加入KNO3,提高地衣芽孢杆菌厌氧发酵的活性。进一步通过过表达fnr基因,使地衣芽孢杆菌的菌体量较对照菌株提高了8%,KNO3消耗速率较对照菌株提高了23%,乳酸在24h积累了0.9g/L。本发明提供的厌氧培养方法工艺简单,为拓宽地衣芽孢杆菌的厌氧发酵应用奠定了理论和实验基础。
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公开(公告)号:CN115820617A
公开(公告)日:2023-03-21
申请号:CN202211327476.7
申请日:2022-10-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性增强的D‑甘露糖异构酶突变体,属于酶工程领域。本发明提供了热稳定性提高的D‑甘露糖异构酶突变体,所述D‑甘露糖异构酶突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID NO:1在第241位、第116位、第379位或第253位是不同的。其中,D‑甘露糖异构酶突变体A241P与亲本酶相比,比酶活和稳定性均有提高,50℃条件下半衰期从18.87min提高到了43.35min,比酶活比提高了150%。
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公开(公告)号:CN114525213B
公开(公告)日:2023-03-17
申请号:CN202210169163.7
申请日:2022-02-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产赤藓糖醇的菌株,其分类命名为解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica),已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.24118。所述菌株由自然界筛选后经过适应性进化获得。本发明还创造性地使用了全细胞回收再次利用的发酵方法,缩短了生产时间,同时减少污染物的排放。
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公开(公告)号:CN112852847B
公开(公告)日:2023-02-28
申请号:CN202110201843.8
申请日:2021-02-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酿酒酵母菌株及其构建方法与应用,属于生物发酵技术领域。其中,α‑法尼烯合成酶FSCS的氨基酸序列用SEQ ID No.1所示。本发明构建了含有该基因的重组表达载体,建立了生物合成法尼烯的方法。本发明对一种此前未明确报道过的萜类合成酶进行了功能表征,并进行了酶学性质的初步研究,在酶学性质的指导下改变发酵条件,实现了法尼烯在酿酒酵母中的生物合成,相较于已报道的苹果来源法尼烯合成酶有更好的表达效果,有利于指导法尼烯在微生物中的高效生产。
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公开(公告)号:CN114621955A
公开(公告)日:2022-06-14
申请号:CN202210327095.2
申请日:2022-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种启动子及促进地衣芽孢杆菌产海藻糖生产用酶的应用,属于发酵工程领域。本发明通过人工改造PP2启动子调控区域,构建了一个活性提高的启动子1upPP2,并利用该启动子在地衣芽孢杆菌中分别表达麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶,使酶活分别提高了37%和10%。本发明还通过优化发酵培养基,使携带1upPP2的重组菌麦芽糖基海藻糖合成酶和麦芽糖基海藻糖水解酶的酶活分别达到2572.5U/mL、358.0U/mL。本发明构建的启动子简单高效,对提高地衣芽孢杆菌表达系统表达水平有实际意义。
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公开(公告)号:CN112501043B
公开(公告)日:2022-02-01
申请号:CN202011508479.1
申请日:2020-12-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公布了一种生产香叶基香叶醇的酿酒酵母工程菌的构建和应用,属于合成生物学技术领域。本发明筛选获得了在酿酒酵母中转化效率较高的香叶基香叶基焦磷酸合成酶PaGGPPs。表达tHMG1、PaGGPPs‑ERG20和PaGGPPs‑DPP1可促进香叶基香叶醇的积累。表达CHK1和IPK1,同时缺损ROX1基因可进一步促进香叶基香叶醇的积累。本发明构建的基因工程菌摇瓶发酵最高能够积累0.77g/L香叶基香叶醇,5L发酵罐120h能够积累4.3g/L香叶基香叶醇。
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公开(公告)号:CN113817736A
公开(公告)日:2021-12-21
申请号:CN202111192261.4
申请日:2021-10-13
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/10
Abstract: 本发明公开了一种具有群体感应特征的启动子及其应用,具有与SEQ ID NO.1所示的序列同源性≥95%的核酸序列,本发明提供的启动子Ptr1来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis BL2)。本发明所述启动子具有前期(1‑5h)表达极弱,后期(16‑48h)表达脉冲型增长的特性,是响应群体密度的自诱导高效表达系统。本发明提供的启动子确保细菌种群达到一定数量后才产生目标产物,无需添加诱导剂,保证了细胞在“生长”与“生产”两相之间进行适时的转变。
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公开(公告)号:CN112795569A
公开(公告)日:2021-05-14
申请号:CN202110200998.X
申请日:2021-02-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 发明公开了一种新型组成型启动子、重组地衣芽孢杆菌及其应用,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR获得Bacillus licheniformis来源的强组成型启动子P2以及Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶目的基因,构建重组质粒pHY‑P2‑tfa,并转化至地衣芽抱杆菌Bacillus licheniformis,得到重组地衣芽抱杆菌。本发明以食品安全的地衣芽孢杆菌为表达宿主,利用新型高活性启动子P2实现麦芽三糖淀粉酶的重组表达。混合碳源麦芽糊精60g/L,葡萄糖10g/L以及42℃的发酵条件更有利于产酶,重组菌发酵的最高酶活达到578.47U/mL。
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