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公开(公告)号：CN104818267A
公开(公告)日：2015-08-05
申请号：CN201510172576.0
申请日：2015-04-14
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: Y02P20/588
Abstract: 本发明公开了一种能够高效催化制备生物柴油的新型纤维生物基材料固定化全细胞催化剂及其制备方法, 所述的全细胞催化剂通过如下步骤制备：产脂肪酶真菌孢子悬浮液的制备；固定化载体的预处理；固定化全细胞生物催化剂的制备；固定化全细胞生物催化剂的交联处理。本方法的固定化全细胞生物催化剂具有制备方法简单、固定效果好和成本低等优点，采用本方法固定化全细胞生物催化剂催化植物油甲酯化催化制备生物柴油，催化剂重复使用6次，脂肪酸甲酯得率稳定在82%以上，且反应条件温和，甲醇添加量低，原料适用性广，使得该工艺更具有经济竞争性。
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公开(公告)号：CN102876594B
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201210333817.1
申请日：2012-09-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用。表面展示系统将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，通过表达菌株KM71H的正常分泌表达，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于毕赤酵母KM71H菌株表面。本发明运用基因融合方法，将米根霉脂肪酶基因与成熟锚定蛋白Pir1p的C端融合，并将基因mpir1插入含有不同启动子pAOX1、pGAP的载体中，获得重组质粒AOX-mPir1、GAP-mPir1，在毕赤酵母KM71H上实现表面展示，并得到高效表达。与pAOX1启动子相比，pGAP启动子不需进行碳源转换，操作简便，诱导过程中不需添加甲醇，减少了甲醇对菌体生长的毒副作用，且最高酶活为614.5 U/L（180.74 [细胞干重]），高于pAOX1为启动子的酵母菌株。具有很好的实用性，能产生很好的经济效益和社会效应。
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公开(公告)号：CN102911701A
公开(公告)日：2013-02-06
申请号：CN201210433498.1
申请日：2012-11-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种制备生物柴油的方法及其使用的复合酶，该方法：在反应容器中，加入短链醇、油脂、水和复合酶，控温30-50℃，反应48-72h，制得生物柴油；其中，短链醇与油脂摩尔比为3~5：1，水的用量为油脂重量的40~100%，复合酶用量为4-22U/g大豆油。该方法不需要加入任何有机溶剂，对环境友好，利用重组菌表达复合酶，不需要购买商业酶，采用复合脂肪酶协同催化，克服单一脂肪酶的底物专一性，提高了酶法制备生物柴油的转酯效率，产品易于分离，且使用复合脂肪酶催化的方法，所需酶量较单一脂肪酶的酶用量减少50%以上，生物柴油中的有效成分即脂肪酸甲酯的得率为98%，从而大大降低了生产成本。具有很好工业化前景。
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公开(公告)号：CN102876594A
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201210333817.1
申请日：2012-09-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用。表面展示系统将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，通过表达菌株KM71H的正常分泌表达，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于毕赤酵母KM71H菌株表面。本发明运用基因融合方法，将米根霉脂肪酶基因与成熟锚定蛋白Pir1p的C端融合，并将基因mpir1插入含有不同启动子pAOX1、pGAP的载体中，获得重组质粒AOX-mPir1、GAP-mPir1，在毕赤酵母KM71H上实现表面展示，并得到高效表达。与pAOX1启动子相比，pGAP启动子不需进行碳源转换，操作简便，诱导过程中不需添加甲醇，减少了甲醇对菌体生长的毒副作用，且最高酶活为614.5U/L（180.74[细胞干重]），高于pAOX1为启动子的酵母菌株。具有很好的实用性，能产生很好的经济效益和社会效应。
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公开(公告)号：CN102864131A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201210333857.6
申请日：2012-09-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐高温阿拉伯多糖酶及其编码基因和应用，该阿拉伯多糖酶的氨基酸序列如SEQNO：1所示。该阿拉伯多糖酶具有极强的耐热性能和偏中性pH条件下高活性的特性。在75℃、pH为6.5的条件下酶活性最高，比酶活达到16.7U/mg；该蛋白酶在温度为60℃-85℃、pH为6.0-8.0的范围内，均具有较高的酶活，在75℃的反应体系中，保温2h酶活性保持不变。这些特性使得本发明得到的阿拉伯多糖酶比现有阿拉伯多糖酶具有更大的优越性，适用于75℃以上高温、偏中性pH条件下水果、蔬菜及半纤维素中阿拉伯多糖的降解，具有潜在的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN102399803A
公开(公告)日：2012-04-04
申请号：CN201110301931.1
申请日：2011-09-30
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 改进的β-葡萄糖苷酶基因及其重组酶的制备，改进的β-葡萄糖苷酶基因核苷酸序列bglII如SEQIDNO.1所述。本发明同时提供了以基础盐为培养基的该重组菌表达β-葡萄糖苷酶的方法。通过对基因的人工进化和高密度发酵，改造后的黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因bglII在毕氏酵母中的表达量较原始基因bglI提高了36倍。本发明可用于β-葡萄糖苷酶基因的分子改造及其重组毕赤酵母基因工程菌的高密度发酵，能显著提高β-葡萄糖苷酶的表达水平。
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公开(公告)号：CN117004594B
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202310844231.X
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及檀香烯合酶突变酶及其在合成檀香烯中的应用。具体涉及的突变酶SanSyn(S533A)、SanSyn(S533Q)、SanSyn(Q527A&S533A)，它们分别是将第533位的丝氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺以及第527位的谷氨酰胺、533位的丝氨酸均突变为丙氨酸。以葡萄糖为碳源，在宿主大肠杆菌DH5α中合成α‑檀香烯的方法，主要包括构建重组质粒pETDuet‑SanSyn(S533A)、pETDuet‑SanSyn(S533Q)、pETDuet‑SanSyn(Q527A&S533A)、pMVA；构建大肠杆菌重组菌株，进一步发酵培养，本发明涉及的技术方案显著提高了α‑檀香烯的产量，蛋白可溶性表达也有所提高。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产α‑檀香烯奠定了基础。对萜烯类合酶的改造工作提供参考。
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公开(公告)号：CN113105556B
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202110195094.2
申请日：2021-02-20
Applicant: 南京林业大学
IPC: C07K19/00 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K38/10 , A61K47/64 , A61K9/51 , A61K47/42 , A61P35/00 , C12R1/19 , A61K31/337
Abstract: 本发明公开了一种修饰ERK多肽抑制剂的铁蛋白纳米粒子及其制备方法和应用，属于抗肿瘤药物制备技术领域。本发明提供的ERK多肽抑制剂修饰的铁蛋白纳米粒子，是将氨基酸序列为MPKKKPTPIQLNP的ERK多肽抑制剂，通过连接序列LEHHHHHHGGGGSGGGGSGGGGS与铁蛋白C末端连接，通过实验证明，本发明的C端修饰ERK多肽抑制剂MPKKKPTPIQLNP的铁蛋白纳米粒子，具有较强的肿瘤细胞生长抑制作用，不仅能够靶向肿瘤细胞，也能抑制肿瘤细胞的增殖生长，所制得的抗肿瘤药物有着很强的细胞毒性，为后续药物靶向肿瘤细胞治疗提供了非常好的载体，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112812191B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202011628068.6
申请日：2020-12-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种提高酶可溶性表达的融合标签及其应用，具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列中的任意一种。本发明涉及了一种普适性强的融合标签，通过在原始酶N末端连接融合标签可以有效提高原始酶的可溶性表达。所述的标签序列可应用于萜类合成酶类，大幅提高酶的可溶性表达，具有很好的普适性和应用前景。
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