公开(公告)号：CN102876594B

公开(公告)日：2015-05-06

申请号：CN201210333817.1

申请日：2012-09-11

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 王飞 ,  王烨 ,  李迅

IPC: C12N1/19 ,  C12N11/16 ,  C12N15/81 ,  C12N9/20 ,  C12R1/84 ,  C12R1/845

Abstract: 本发明公开了一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用。表面展示系统将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，通过表达菌株KM71H的正常分泌表达，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于毕赤酵母KM71H菌株表面。本发明运用基因融合方法，将米根霉脂肪酶基因与成熟锚定蛋白Pir1p的C端融合，并将基因mpir1插入含有不同启动子pAOX1、pGAP的载体中，获得重组质粒AOX-mPir1、GAP-mPir1，在毕赤酵母KM71H上实现表面展示，并得到高效表达。与pAOX1启动子相比，pGAP启动子不需进行碳源转换，操作简便，诱导过程中不需添加甲醇，减少了甲醇对菌体生长的毒副作用，且最高酶活为614.5 U/L（180.74 [细胞干重]），高于pAOX1为启动子的酵母菌株。具有很好的实用性，能产生很好的经济效益和社会效应。

公开(公告)号：CN102876594A

公开(公告)日：2013-01-16

申请号：CN201210333817.1

申请日：2012-09-11

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 王飞 ,  王烨 ,  李迅

IPC: C12N1/19 ,  C12N11/16 ,  C12N15/81 ,  C12N9/20 ,  C12R1/84 ,  C12R1/845

Abstract: 本发明公开了一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用。表面展示系统将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，通过表达菌株KM71H的正常分泌表达，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于毕赤酵母KM71H菌株表面。本发明运用基因融合方法，将米根霉脂肪酶基因与成熟锚定蛋白Pir1p的C端融合，并将基因mpir1插入含有不同启动子pAOX1、pGAP的载体中，获得重组质粒AOX-mPir1、GAP-mPir1，在毕赤酵母KM71H上实现表面展示，并得到高效表达。与pAOX1启动子相比，pGAP启动子不需进行碳源转换，操作简便，诱导过程中不需添加甲醇，减少了甲醇对菌体生长的毒副作用，且最高酶活为614.5U/L（180.74[细胞干重]），高于pAOX1为启动子的酵母菌株。具有很好的实用性，能产生很好的经济效益和社会效应。