公开(公告)号：CN102021164A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN201010535809.6

申请日：2010-11-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陆兆新 ,  张充 ,  别小妹 ,  吕凤霞 ,  王煜 ,  赵海珍

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明公开了一种无抗生素抗性标记的枯草芽孢杆菌构建方法及筛选靶基因失活的枯草芽孢杆菌的方法。本方法首先以枯草芽孢杆菌168为出发菌株，构建两个同源交换片段，利用同源重组原理，通过两次双交换过程构建了一个可调控的赖氨酸营养缺陷型菌株BS-PS。以大肠杆菌克隆载体pMD19-T为骨架构建了通用型整合突变载体PLC，以枯草芽孢杆菌中性蛋白酶nprE为失活靶基因，采用插入失活策略，以PLC为基础，构建了插入失活nprE的整合载体PLC-InprE，转化入BS-PS，通过一次单交换，以及一次自发单交换过程，以控制赖氨酸的合成为筛选标记结合PCR验证结果，对蛋白酶插入失活的突变菌株进行筛选。

公开(公告)号：CN101173258B

公开(公告)日：2010-08-18

申请号：CN200710132677.0

申请日：2007-09-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陆兆新 ,  房耀维 ,  吕凤霞 ,  别小妹 ,  赵海珍 ,  刘姝

IPC: C12N9/20 ,  C12N15/55 ,  C11D3/386 ,  C10G3/00 ,  C12S11/00 ,  C12R1/37

CPC classification number: Y02E50/13 ,  Y02P30/20

Abstract: 本发明涉及一种普通变形杆菌脂肪酶突变体及其应用，属于生物技术领域。该普通变形杆菌脂肪酶突变体是将野生型变形杆菌脂肪酶的氨基酸残基序列进行突变后得到的蛋白质：1)第102位的缬氨酸突变为异亮氨酸；2)第197位的甘氨酸突变为丝氨酸；3)第229位的精氨酸突变为组氨酸。编码普通变形杆菌脂肪酶突变体的全长基因，其序列为SEQ IDNO.1，长861bp。表达产物重组脂肪酶，分子量为31.5kDa。突变脂肪酶在制备生物柴油方面的应用，可高效地催化制备生物柴油。该脂肪酶突变体酶活性高，反应条件温和，在食品加工、生物柴油及洗涤用品添加剂中有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。