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公开(公告)号：CN103882054B
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201410131935.3
申请日：2014-04-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法，该外源基因为GUS基因，由携带35s启动子及终止子，小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括（1）植株的获得（2）植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建（3）侵染液制备（4）菊花叶片的制备（5）叶片转化（6）叶片转化后培养7）阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株，通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体；同时，以P19与农杆菌混合培养制成侵染液，P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应，提高表达量，并且合理优化共培养条件，使该方法转化时间缩短至45天左右，转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。
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公开(公告)号：CN105766409A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610105578.2
申请日：2016-02-25
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01G7/06
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖处理促进菊花开花的方法，包括以下：当菊花插扦苗有完全展开叶10～14片时，每隔2～4天向处于长日照条件下的菊花插扦苗浇灌一次浓度为1.0％～3.0的蔗糖溶液，蔗糖溶液的浇灌量为30～40ml/株，至现蕾停止浇灌蔗糖溶液。本发明方法简单准确、有效，通过采用蔗糖水溶液对菊花的根际进行处理，为菊花开花提供充足的能量，同时蔗糖在植物体内还参与合成6?磷酸海藻糖，6?磷酸海藻糖为合成“开花素”FT蛋白所必须的物质，除此之外，蔗糖还可以直接促进FT基因的表达从而促进开花进程。蔗糖处理使其现蕾日期提前，浇灌蔗糖溶液38天即可完全现蕾，促进了菊花开花，效果明显。
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公开(公告)号：CN104498475A
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201410695615.0
申请日：2014-11-26
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供一种菊花抗旱性关联分子标记的获得方法，用于菊花抗旱性优良基因的定位和克隆及菊花新品种的培育。该获得方法包括a.抗旱性鉴定；b.菊花品种群体结构分析；c.菊花品种亲缘关系分析；d、与菊花抗旱性紧密关联的分子标记的确定。本方法同时运用SRAP、SCoT和EST-SSR三种分子标记技术，原理各不相同且各有针对，得到的染色条带多态性好，重复性高，可以覆盖整个基因组且条带数量非常丰富，有利于获得与抗旱性紧密相关的分子标记。共获得菊花抗旱性关联分子标记8个，实现优良抗旱品种提早选择，定向选择和准确选择，可以减少工作量，大大提高菊花抗旱基因型的选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN104313155A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410581350.1
申请日：2014-10-27
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6827 , C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供一种托桂型菊花花器特性QTL分子标记筛选方法，该种方法可用于托桂型菊花花器性状优良基因的定位和克隆及托桂型菊花新品种的培育。包括：1.试验材料及其表型数据的获得；2.菊花连锁图谱构建；3.结合表型数据和分子遗传图谱，进行托桂型菊花花器性状的QTL分析；4.托桂型菊花花器性状关联分子标记的确定。本发明以托桂型秋菊品种“QX-053”为母本和非托桂型秋菊品种“南农惊艳”为父本杂交获得的160株F1分离群体为试材，获得了多个与托桂型菊花花器性状显著关联的分子标记。托桂型菊花花器性状关联分子标记的获得，可用于托桂型菊花花器性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快托桂型菊花育种进程。
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公开(公告)号：CN103882054A
公开(公告)日：2014-06-25
申请号：CN201410131935.3
申请日：2014-04-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法，该外源基因为GUS基因，由携带35s启动子及终止子，小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括（1）植株的获得（2）植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建（3）侵染液制备（4）菊花叶片的制备（5）叶片转化（6）叶片转化后培养（7）阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株，通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体；同时，以P19与农杆菌混合培养制成侵染液，P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应，提高表达量，并且合理优化共培养条件，使该方法转化时间缩短至45天左右，转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103828710A
公开(公告)日：2014-06-04
申请号：CN201410100386.3
申请日：2014-03-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H1/02
Abstract: 本发明为一种高效率菊花杂交育种的方法，属于生物技术育种领域，本发明选择杂交后代种子，经75%乙醇消毒1min及5%次氯酸钠消毒50min后，播种于含15g·L-1蔗糖的MS培养基上，并结合组织培养技术，进一步扩繁和继代培养，获得大量的无菌苗。本方法切实提高了杂交种子发芽率和成苗率，并且对于部分存在杂交不亲和性的菊花品种，可将由少量的杂交后代种子获得的无菌苗于当年进行继代扩繁，以获得较大群体的株系，从而缩短育种周期，并进一步丰富了菊花育种手段。
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公开(公告)号：CN102660557B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201210171527.1
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了菊花水孔蛋白编码基因CmAQP及其植物表达载体和构建方法。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmAQP是由CmAQP基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmAQP基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成CmAQP蛋白，从而提高拟南芥种子盐胁迫下的萌发率。
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公开(公告)号：CN103233075A
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201310170677.5
申请日：2013-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性，在转录组测序的基础上，结合Perl编程语言方法，对大量序列信息进行批量处理，进行SSR序列查找和SSR标记引物设计，克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证，若有条带检测出，即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物，为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。
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公开(公告)号：CN102174566B
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201110048927.9
申请日：2011-03-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CgHSP70基因提高切花菊抗逆性的方法。将从菊花‘钟山紫桂’中克隆得到的CgHSP70基因构建植物表达载体采用农杆菌介导法转入到切花菊中，进行培养初步获得抗性植株，经过潮霉素抗性筛选得到阳性转化植株。对转化植株进行PCR和荧光定量PCR分析，证实内源基因已经转入到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株后代进行抗性分析证实其对高温、干旱及高盐的抗性有明显的提高。本发明通过转化内源CgHSP70基因并正常转录表达，及在逆境下诱导该基因的表达从而提高切花菊的抗逆性，为利用基因工程技术选育菊花抗逆性品种提供新颖而使用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN102660557A
公开(公告)日：2012-09-12
申请号：CN201210171527.1
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了菊花水孔蛋白编码基因CmAQP及其植物表达载体和构建方法。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmAQP是由CmAQP基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmAQP基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成CmAQP蛋白，从而提高拟南芥种子盐胁迫下的萌发率。
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