公开(公告)号：CN116334106A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202211121519.6

申请日：2022-09-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨生超 ,  郭兆宽 ,  张广辉 ,  王益娜 ,  陈庚 ,  舒彦宇 ,  李志远 ,  冯孝林

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12P33/00 ,  C12P33/06

Abstract: 本发明公开了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因及其转基因工程菌在制备葫芦素中间体中的应用。鉴别获得雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因，极大地推进了雪胆素(葫芦素IIa和葫芦素IIb)生物合成路径关键酶基因的挖掘，不仅能够帮助育种家进行分子标记辅助育种，而且还可以借助代谢工程和合成生物学方法对葫芦素进行工业化生产，也将为新药开发提供新的思路。提供了含有雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59的重组质粒、转基因工程菌和酿酒酵母重组菌Cuol04，为通过生物工程方法合成11‑羰基‑20β‑羟基‑Cuol、11‑羰基‑Cuol以及11‑羰基‑2β,20β‑二羟基‑Cuol，进一步为雪胆素生物合成调控研究奠定基础。

公开(公告)号：CN115336532B

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202210827180.5

申请日：2022-07-13

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 赵艳 ,  白红娟 ,  高青青 ,  李霞 ,  翟晨曦 ,  杨生超 ,  张广辉 ,  龙光强 ,  陈庚 ,  冯垒

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明涉及一种可抑制雪胆块茎愈伤组织褐变的诱导方法，属于组织培养领域，本发明包括配制培养基：按照MS培养基2.37g/L、琼脂3.5g/L、蔗糖15g/L、6‑BA 0.2‑1.8mg/L、NAA 0.1‑1.5mg/L配制，调PH至5.6‑6，灭菌、超净工作台倒平板后标记备用；将洗净、消毒后的雪胆块茎在无菌条件下接种于培养基上，然后置于20℃的组培室内培养。本发明通过在培养基内添加6‑BA和NAA，可在有效诱导愈伤组织分化的同时抑制愈伤组织的褐化。

公开(公告)号：CN116083519A

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202211648260.0

申请日：2022-12-21

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 杨生超 ,  舒彦宇 ,  张广辉 ,  和四梅 ,  陈庚 ,  冯孝林 ,  李志远 ,  郭振宇 ,  马骁 ,  王飞飞

IPC: C12Q1/32 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明属于酶活性检测技术领域，具体涉及一种基于荧光检测的短链脱氢还原酶(SDR酶)活性的高通量测定方法及其应用。所述高通量测定方法包括以下步骤：(1)SDR粗酶的表达；(2)SDR粗酶中SDR目标蛋白的提取；(3)NADH的荧光信号检测，以确定所述SDR酶活性；其中，优选地，所述测定方法是在96孔板中进行的。本发明提供的基于荧光检测的SDR酶活性的高通量测定方法通量高、灵敏度高、操作方便、成本低廉，为快速、高效筛选SDR酶突变体的催化活性，提高SDR酶筛选过程中的定向进化效率提供了新方法，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115896136A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211655229.X

申请日：2022-12-22

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 杨生超 ,  舒彦宇 ,  张广辉 ,  郝冰 ,  陈庚 ,  冯孝林 ,  李志远 ,  郭振宇 ,  马骁 ,  王飞飞

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06

Abstract: 本发明涉及一种与葫芦二烯醇羟化相关的细胞色素P450基因及其编码产物，属于基因工程领域。所述基因其核苷酸分别如SEQ ID NO：1‑5所示。本发明还提供了与基因相关的编码蛋白、载体、工程菌以及应用。

公开(公告)号：CN112961870B

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202110215836.3

申请日：2021-02-26

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 郝冰 ,  袁慧娟 ,  张广辉 ,  杨生超 ,  刘祥宇 ,  谢家伟 ,  陈小巧

IPC: C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种假地豆植物中碳糖基转移酶DhCGT2基因及应用，属于生物技术领域。该假地豆植物中碳糖基转移酶DhCGT2基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，序列全长1422 bp；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码了473个氨基酸残基，可用于制备夏佛塔苷和异夏佛塔苷。本发明首次在山蚂蝗属植物假地豆中发现一种碳糖基转移酶，具有催化以二羟基柚皮素为底物生成牡荆素、异牡荆素和催化以二羟基柚皮素葡萄糖碳苷为底物生成夏佛塔苷和异夏佛塔苷功能，为在植物体外异源表达牡荆素、异牡荆素、夏佛塔苷和异夏佛塔苷提供了高效的生物合成方法。

公开(公告)号：CN109486997B

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN201811589525.8

申请日：2018-12-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  杨生超 ,  刘冠泽 ,  卢迎春 ,  赵艳 ,  范伟 ,  掲应碧 ,  李莹

IPC: C12Q1/6895

Abstract: 本发明涉及分子技术领域，具体涉及三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途，人参皂苷Rb1与位点SSR35，SSR2‑57有关联。本发明对SSR标记与人参皂苷Rb1的关联性研究，有利于高含量皂苷Rb1三七品种的选育的开展。

公开(公告)号：CN109652581B

公开(公告)日：2022-04-12

申请号：CN201811590515.6

申请日：2018-12-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨生超 ,  张广辉 ,  卢迎春 ,  刘冠泽 ,  赵艳 ,  范伟 ,  掲应碧 ,  李莹

IPC: C12Q1/6895

Abstract: 本发明涉及分子技术领域，具体涉及三七SSR标记在皂苷Rd含量确定上的用途，人参皂苷Rd与位点SSR35，SSR9，SSR42，SSR2‑57有关联。本发明对SSR标记与皂苷Rd的关联性研究，有利于高含量皂苷Rd三七育种的开展。

公开(公告)号：CN112285239A

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN202011150157.4

申请日：2020-10-24

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  贾兵 ,  范伟 ,  陈庚 ,  李晓波 ,  李莹 ,  宋婉玲 ,  杨生超 ,  卢迎春 ,  刘冠泽 ,  张双艳 ,  林源

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/14 ,  G01N30/34 ,  G01N30/60

Abstract: 本发明涉及一种检测三七叶片皂苷的HPLC方法，属于医学技术领域。该方法包括供试样品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件、色谱峰测定等几大步骤。本发明的HPLC方法可在短时间准确测出三七叶中人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3，三七皂苷Fa、Fe及七叶胆苷XⅦ7种皂苷单体含量，且该方法在精密度、稳定性、重复性、最低检测限、加样回收率上均符合《中华人民共和国药典》相关标准，快速简便，稳定可靠，易于推广应用。

公开(公告)号：CN111955122A

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN202010842587.6

申请日：2020-08-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 范伟 ,  施辉能 ,  李浩 ,  徐瑞 ,  龙光强 ,  田洋 ,  马丽宣 ,  王占旗 ,  王顺达 ,  张广辉 ,  陈军文 ,  杨生超

IPC: A01C21/00 ,  A01G22/25 ,  C05G1/00 ,  C05F5/00

Abstract: 本发明提供了一种用于提高玛咖的质量和产量的施肥方法，具体包括如下步骤：S1：株行距25×25cm，采用人工移栽，每穴定植1苗，定植深度3-5cm，每个小区定植株数为336株，整平做畦并覆盖黑色反光防虫地膜；S2:有机肥全部作为基肥，在移栽前撒施；磷肥、钾肥和40％的氮肥作为基肥，穴施；剩余60％的氮肥分别在8月和9月各追一次施。本发明通过增施有机肥对玛咖地上部和地下部农艺性状的生长、产量和品质有显著提高。在8-10月份，主要围绕地上部的生长，10月份达到最高地上部植株鲜重为99.70g/株，从10月份开始地下部生长加快，11月达到最高为地下部鲜重为54.98g/株；在整个生育期中，玛咖生长前期对磷钾的需求较高，适应了在生育期内对氮的需求。

公开(公告)号：CN111869565A

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN202010687824.6

申请日：2020-07-16

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 冯垒 ,  杨生超 ,  张广辉 ,  马春花 ,  刘冠泽 ,  和四梅 ,  查明思 ,  谢业翠 ,  张双艳 ,  闫静 ,  向贵生 ,  郭兆宽 ,  李满桥 ,  张家琪 ,  徐文娟 ,  朱金玉 ,  韩堂珍

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种三七绿色胚性愈伤组织扩繁的培养方法，涉及愈伤组织培养技术领域，包括以下步骤：步骤A：三七愈伤组织的准备；步骤B：液体培养基制作；步骤C：纸桥培养。该三七绿色胚性愈伤组织扩繁的培养方法，通过本配方配置的液体培养基，搭配培养三七愈伤组织的纸桥，通过该种培养方法，使三七愈伤组织能够快速持续的吸收液体培养基内的培养液，使愈伤组织营养吸收稳定均衡且高效，以达到培养三七愈伤组织快速扩繁的效果，通过2,4-D、6-BA、NNA和IBA四种激素组成液体培养基，使三七愈伤组织生长稳定性更强，且涨势速度快，愈伤组织健康，生长态势更加优异。