一种提高棉花转基因效率的方法

    公开(公告)号:CN104004783B

    公开(公告)日:2016-08-24

    申请号:CN201410184231.2

    申请日:2014-05-04

    Abstract: 本发明提供了一种提高棉花转基因效率的方法,所述方法含有以下步骤:a.采用农杆菌介导法将含有目的基因的植物表达载体侵染棉花无菌苗茎尖,将侵染后的棉花茎尖置于共培养培养基上进行共培养;b.共培养后,将棉花茎尖转入筛选培养基上培养;所述共培养培养基与筛选培养基中均含有浓度为0.3mg/L的KT和浓度为0.2mg/L的IAA。利用本发明方法进行无菌苗培养时间2?3天,共培养2天,筛选培养15?20天,生根培养20天,转化周期不超过2个月,且经筛选后阳性转化率能达到8%。

    棉花多胺氧化酶GhPAO2基因及其应用

    公开(公告)号:CN103421749B

    公开(公告)日:2014-12-03

    申请号:CN201310290630.2

    申请日:2013-07-11

    Abstract: 本发明公开了棉花多胺氧化酶GhPAO2基因及其应用,所述棉花多胺氧化酶GhPAO2基因序列如SEQ ID No.3所示。本发明以‘冀棉20’的根部组织为材料,通过生物信息学和RT-PCR技术克隆出了棉花多胺氧化酶基因GhPAO2的全长cDNA序列,将其构建至原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功表达出外源蛋白。体外实验证明纯化后的GhPAO2是以FAD为辅基的黄素蛋白,具有亚精胺氧化酶和精胺氧化酶活性。对GhPAO2表达菌株和含空载体的对照菌株进行不同浓度氯化钠处理,发现相同处理条件下转基因菌株的细胞数量与对照菌株相比显著增加,表明GhPAO2在大肠杆菌中的表达提高了宿主菌的耐盐性。

    棉花多胺氧化酶GhPAO2基因及其应用

    公开(公告)号:CN103421749A

    公开(公告)日:2013-12-04

    申请号:CN201310290630.2

    申请日:2013-07-11

    Abstract: 本发明公开了棉花多胺氧化酶GhPAO2基因及其应用,所述棉花多胺氧化酶GhPAO2基因序列如SEQ ID No.3所示。本发明以“冀棉20”的根部组织为材料,通过生物信息学和RT-PCR技术克隆出了棉花多胺氧化酶基因GhPAO2的全长cDNA序列,将其构建至原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功表达出外源蛋白。体外实验证明纯化后的GhPAO2是以FAD为辅基的黄素蛋白,具有亚精胺氧化酶和精胺氧化酶活性。对GhPAO2表达菌株和含空载体的对照菌株进行不同浓度氯化钠处理,发现相同处理条件下转基因菌株的细胞数量与对照菌株相比显著增加,表明GhPAO2在大肠杆菌中的表达提高了宿主菌的耐盐性。

    植物表达载体pCamE及其在基因转化中的应用

    公开(公告)号:CN102816790A

    公开(公告)日:2012-12-12

    申请号:CN201210323707.7

    申请日:2012-09-04

    Abstract: 本发明提供了一种含有启动子-多克隆位点-终止子序列的植物表达载体,通过PCR反应和限制性内切酶酶切、连接技术将CaMV 35S启动子,质粒载体的多克隆位点和NOS终止子依次克隆并插入到双元载体的多克隆位点,构建成植物表达载体。本发明提供的植物表达载体pCamE可以完整独立的驱动插入基因的表达,在该载体的多克隆位点、启动子上游和终止子下游分别提供了8个、4个和3个,共计15个限制性内切酶酶切位点,可方便使用。pCamE载体具有在大肠杆菌中拷贝数高,在植物宿主材料内能够稳定遗传、表达的特点,且在使用过程中方便、快捷、经济和实用。

    一种棉花幼胚离体培养和植株形成的培养基及培养方法

    公开(公告)号:CN100427589C

    公开(公告)日:2008-10-22

    申请号:CN200710151837.6

    申请日:2007-09-21

    Abstract: 本发明公开一种棉花幼胚离体培养和植株形成的培养基及培养方法,它是在对培养基中的大量元素、微量元素、氨基酸、植物激素、糖类等各个组成成分进行多次正交设计及梯度试验基础上得到的。其培养基中大量元素是MS培养基中大量元素的一半;微量元素和MS培养基相同;有机成分与B5培养基的有机成分及用量相同;应用脯氨酸、谷氨酰胺等对幼胚发育及植株形成有利的营养成分;配合一定用量的植物激素和棉花幼铃干燥处理等培养方法,实现了棉花离体幼胚的直接萌发和植株形成。用此培养体系培养开花后20~25天的棉花离体幼胚,可使幼胚直接萌发并发育形成植株,其幼胚成苗率达40%以上。

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