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公开(公告)号：CN113957071A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202111161871.8
申请日：2021-09-30
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开一种具有双重启动子和双重分泌信号功能的组合DNA片段及其应用，属于基因工程技术领域。本发明采用双启动子双信号肽Pcd‑P43‑SamyQ‑SBsGGT表达系统在枯草芽孢杆菌中合成γ‑谷氨酰胺转肽酶，其效果显著较双启动子单信号肽Pcd‑P43‑SamyQ表达系统的单位酶活力提高至161.45％，而Pcd‑P43‑SBsGGT‑SamyQ表达效果微弱。不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件；不仅能够简化生产工艺流程，降低生产成本，同时能使制备的蛋白酶产品达到符合食品安全级别酶制剂的要求。
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公开(公告)号：CN110106157B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201910306109.0
申请日：2019-04-17
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种经优化的能在黑曲霉中高效表达的高温海藻糖酶MS‑Tre及其编码基因与应用。经优化的高温海藻糖酶MS‑Tre，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明经优化的高温海藻糖酶MS‑Tre编码基因与优化前的编码基因相比，可以在黑曲霉中更高效表达，重组黑曲霉菌株可以高产海藻糖酶。本发明提供的海藻糖酶稳定性好，在高温条件下也能将二糖水解成单糖，降低淀粉液化后的冷却耗能和提高淀粉质原料的利用率，提高生物能源的利用效率，降低生产成本，本发明提供的海藻糖酶MS‑Tre及其编码基因对实现海藻糖酶工业化生产具有一定的现实意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN106947766B
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN201710235662.0
申请日：2017-04-12
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN105969675B
公开(公告)日：2019-11-15
申请号：CN201610308960.3
申请日：2016-05-10
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种低转苷酶背景的糖化酶高产菌基因敲除重组菌及其构建与应用，属于生物技术领域。本发明的重组菌是通过失活α‑葡萄糖转苷酶表达相关的一个或多个基因后得到的。本发明的实验证明，本发明通过对一株高产糖化酶的黑曲霉pyrG缺陷型Aspergillus niger SH‑2:ΔpyrG进行基因工程改造，失活基因agdB、agdA和agdE后，得到低转苷酶活性的新菌株，利用该菌株发酵生产的糖化酶与原始菌株相比，糖化酶酶活增加33％，α‑葡萄糖转苷酶酶活降低43％以上，简化了从发酵液中去除转苷酶的分离纯化工艺，降低了生产成本，具有一定的创新性，有较强的开发意义。
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公开(公告)号：CN106085937B
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201610429216.9
申请日：2016-06-15
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌重组菌株及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明所提供的重组菌株是将枯草芽孢杆菌中的十个蛋白酶基因敲除或失活得到，这十个蛋白酶基因为：nprE、nprB、aprE、mpr、bpf、epr、vpr、wprA、spollAC和srfAC。本发明通过同源重组方法进行前述10个蛋白酶基因的敲除，得到的枯草芽孢杆菌重组菌株生长快、且外源蛋白表达量高。因此，该重组菌株可作为外源蛋白高效表达的宿主。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107698668A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710990059.3
申请日：2017-10-23
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌可提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种氨基酸片段，为具有很强的分泌表达活性的信号肽，能实现外源基因的高表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN107698667A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710990058.9
申请日：2017-10-23
Applicant: 华南理工大学
CPC classification number: C07K14/32 , C07K2319/02 , C12N9/1044 , C12N9/2471 , C12Y203/02013 , C12Y302/01023
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种可提高分泌效率的信号肽，使用后可显著提高菌株的分泌能力，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。本发明中将其应用于耐热β-半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达。
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公开(公告)号：CN107119051A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710235664.X
申请日：2017-04-12
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/11 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种巨大芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN106947766A
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201710235662.0
申请日：2017-04-12
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN106085937A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610429216.9
申请日：2016-06-15
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌重组菌株及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明所提供的重组菌株是将枯草芽孢杆菌中的十个蛋白酶基因敲除或失活得到，这十个蛋白酶基因为：nprE、nprB、aprE、mpr、bpf、epr、vpr、wprA、spollAC和srfAC。本发明通过同源重组方法进行前述10个蛋白酶基因的敲除，得到的枯草芽孢杆菌重组菌株生长快、且外源蛋白表达量高。因此，该重组菌株可作为外源蛋白高效表达的宿主。
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