公开(公告)号：CN116064267B

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202211438823.3

申请日：2022-11-17

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 林源 ,  杨生超 ,  张广辉 ,  郝冰 ,  卢迎春 ,  王益娜

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/54 ,  C12P33/20 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。本发明将糖基转移酶PnUGT50和糖基转移酶PnUGT31进行酵母密码子优化，分别在组合型启动子和G418抗性标签的作用下，插入ZW04BY酵母基因组的δ序列多拷贝位点，获得生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌。本发明通过在起始菌株ZW04BY酿酒酵母中异源过表达人参皂苷Rg3通路合成的2个关键酶实现了人参皂苷Rg3在酿酒酵母中的生产，使其产量达到254.07±56.49mg/L，本发明的方法为人工细胞高效合成人参皂苷Rg3奠定了基础。

公开(公告)号：CN118165972A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410031792.2

申请日：2024-01-09

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨生超 ,  李晓波 ,  丁靖洋 ,  郝冰 ,  张广辉 ,  卢迎春 ,  刘冠泽 ,  和四梅 ,  王雪 ,  张迎

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/00 ,  A61K38/52 ,  A61K31/575 ,  A61P9/00 ,  A61P9/10 ,  A61P5/00 ,  A61P25/00 ,  A61P35/00 ,  A61P3/10 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了氧化鲨烯环化酶NiOSC4和其编码产物达玛烯二醇‑Ⅱ的应用，属于合成生物学和天然药物技术领域。本发明从葫芦科植物棒锤瓜（Neoalsomitra integrifoliola）出发，克隆并功能鉴定了一个合成达玛烯二醇‑Ⅱ的三萜合酶NiOSC4编码基因，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示，对其进行基因克隆后与表达载体pYES2连接，构建成为能够在大肠杆菌中表达的重组质粒，再将重组质粒转化至酿酒酵母中构建成为工程细胞，实现了酿酒酵母异源高效合成化合物达玛烯二醇‑Ⅱ，本发明构建的该基因工程细胞安全稳定，生产周期短，显示出其在应用开发中的重大价值。本发明提供的NiOSC4产物达玛烯二醇‑Ⅱ可用于制备抗心脑血管疾病、内分泌系统疾病、中枢神经系统疾病、抗癌、抗糖尿病的药物。

公开(公告)号：CN117866932A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202410031795.6

申请日：2024-01-09

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  李晓波 ,  杨生超 ,  王雪 ,  郝冰 ,  丁靖洋 ,  张迎 ,  卢迎春 ,  和四梅 ,  刘冠泽

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/00 ,  A61K38/52 ,  A61K31/575 ,  A61P37/08 ,  A61P17/00 ,  A61P35/00 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了氧化鲨烯环化酶NiOSC6和其编码产物葫芦二烯醇的应用，属于合成生物学和天然药物技术领域。本发明从葫芦科植物棒锤瓜（Neoalsomitra integrifoliola）出发，克隆并功能鉴定了一个合成葫芦二烯醇的三萜合酶NiOSC6编码基因，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示，对其进行基因克隆后与表达载体pYES2连接，构建成为能够在大肠杆菌中表达的重组质粒，再将重组质粒转化至酿酒酵母中构建成为工程细胞，实现了酿酒酵母异源高效合成化合物葫芦二烯醇，本发明构建的该基因工程细胞安全稳定，生产周期短，显示出其在应用开发中的重大价值。本发明提供的NiOSC6产物葫芦二烯醇在制备抗过敏、保湿、促进皮肤细胞生长、抑制黑色素细胞增长、抗肿瘤的药物中的应用。

公开(公告)号：CN117844830A

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202410119212.5

申请日：2024-01-29

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 张广辉 ,  黄春丽 ,  杨生超 ,  郝冰 ,  陈庚 ,  舒彦宇 ,  李志远 ,  冯孝林 ,  和四梅 ,  卢迎春 ,  马骁 ,  马飞飞 ,  郭振宇 ,  马迪娜 ,  张建丽 ,  贺雪颖 ,  刘勤勤

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06 ,  C12P33/00 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明提供了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D19基因，所述基因的序列如SEQNO：1所示。本发明构建了共转染雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D19和HcCYP81Q58的转基因酵母工程菌，该菌能够高产多种葫芦素中间体，包括11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,16a,20,25‑tetrol(6)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,16α,20,25‑tetrol(6b)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑16α,20,25‑triol‑3‑one(6a)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑16α,20,23‑triol‑3‑one(6c)，为葫芦素生产提供了来源。

公开(公告)号：CN117821490A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202311746115.0

申请日：2023-12-19

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  冯孝林 ,  杨生超 ,  郝冰 ,  陈庚 ,  舒彦宇 ,  李志远 ,  马迪娜 ,  和四梅 ,  卢迎春 ,  贺雪颖 ,  张建丽 ,  黄春丽

IPC: C12N15/81 ,  C12N9/04 ,  C12N9/02 ,  C12N9/10 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12P33/02 ,  C12N9/90 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种编码细胞色素P450酶的多功能基因CYP87D20构建基因工程菌DNHc87‑03的方法，该基因工程菌能催化葫芦二烯醇的C11氧化和C20位羟化生成葫芦素中间体11‑carbonyl‑Cuol和11‑carbonyl‑20β‑hydroxy‑Cuol；一种短链脱氢酶synHcSDR3构建的基因工程菌DNHc87‑S‑01能在11‑carbonyl‑Cuol和11‑carbonyl‑20β‑hydroxy‑Cuol的C3位进行脱氢反应形成酮基分别生成为11‑Carbonyl‑Cucurbita‑5,24‑dien‑3‑one和11‑Carbonyl‑20β‑hydroxy‑Cucurbita‑5,24‑dien‑3‑one，它们是合成葫芦素C/B/D/E/I等的重要中间体，采用酵母同源重组组装构建酿酒酵母底盘细胞生产目标化合物，极大地推动了对葫芦素生物合成分子机理的认知，也将为雪胆甲素和葫芦素的全合成奠定基础。

公开(公告)号：CN117502239A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311676203.8

申请日：2023-12-08

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 梁艳丽 ,  袁媛 ,  张晓玉 ,  张晓东 ,  赵艳 ,  吴靓 ,  徐艳姣 ,  陈永生 ,  韩光明 ,  卢迎春 ,  和四梅 ,  孟珍贵 ,  韩俊 ,  和淑琪 ,  彭识 ,  张国武

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种能防止褐化的川贝母组织培养方法，包括以下步骤：取川贝母新鲜鳞茎作为外植体，进行清洗消毒、接种前预处理和预培养；所述预培养使用的培养基包括如下组分：MS，蔗糖25～35g/L，琼脂6～7.6g/L，IBA0.5～1.5mg/L，NAA0.5～1.5mg/L，2,4‑D0.3～0.7mg/L，碳0.1～0.3g/L。本发明的优点是:采用本发明的组织培养方法获得的川贝母药材苗长势良好，无褐变，颜色均匀，整体外观好，且产品质量较高。

公开(公告)号：CN117417949A

公开(公告)日：2024-01-19

申请号：CN202311356007.2

申请日：2023-10-19

Applicant: 云南农业大学 ,  云南云科特色植物提取实验室有限公司

Inventor： 张广辉 ,  李志远 ,  杨生超 ,  郝冰 ,  陈庚 ,  舒彦宇 ,  冯孝林 ,  马迪娜 ,  和四梅 ,  卢迎春 ,  马骁 ,  马飞飞 ,  郭振宇 ,  黄春丽 ,  贺雪颖 ,  张建丽

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06 ,  C12P33/02 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明提供了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58基因，所述基因的序列如SEQ NO：1所示。本发明构建了雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58转基因酵母工程菌，该菌能够高产多种葫芦素中间体，包括11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,20,25‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑3β,20,23‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑20,25‑diol‑3β‑one和11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑20,23‑diol‑3β‑one，为葫芦素生产提供了来源。

公开(公告)号：CN117327715A

公开(公告)日：2024-01-02

申请号：CN202311077715.2

申请日：2023-08-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张广辉 ,  张双艳 ,  刘祥宇 ,  杨生超 ,  赵艳 ,  和四梅 ,  郝冰 ,  卢迎春 ,  向贵生 ,  冯垒

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/06 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明涉及一种假马齿苋P450酶基因BmCYP068及在制备23‑OH‑Dammarenediol II和25‑OH‑Dammarenediol II中的应用，属于生物技术领域。该假马齿苋P450酶基因BmCYP068核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，序列全长1554bp；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码了518个氨基酸残基。本发明假马齿苋P450酶基因BmCYP068可作为23‑OH‑Dammarenediol II和25‑OH‑Dammarenediol II的生物合成调控基因，并应用于对其的制备，应用前景显著，易于推广应用。

公开(公告)号：CN116114559A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202310252018.X

申请日：2023-03-16

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 何澍然 ,  马俏冉 ,  杨生超 ,  陈军文 ,  字淑慧 ,  沙本才 ,  卢迎春 ,  张广辉 ,  梁艳丽 ,  范伟 ,  刘冠泽 ,  郝冰 ,  龙光强 ,  和四梅 ,  刘家敏

IPC: A01G22/25 ,  A01G7/06

Abstract: 本发明提供一种林下栽培西洋参的方法，包括：(1)选择适宜生长的林地；(2)整地；(3)根据林地树木种植方向进行起垄；(4)选择二年生种苗，采用斜栽方式进行移栽；(5)在林下采用纤维杆作为支撑材料间隔1.5m起拱搭建避雨棚；(6)分别在西洋参展叶期、开花期、结果期时期结合灌溉进行海藻提取物的施用。本发明提供的林下栽培西洋参的方法，通过施用海藻提取物对西洋参进行追肥，提高了林下栽培的西洋参的产量。

公开(公告)号：CN116064267A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211438823.3

申请日：2022-11-17

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 林源 ,  杨生超 ,  张广辉 ,  郝冰 ,  卢迎春 ,  王益娜

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/54 ,  C12P33/20 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。本发明将糖基转移酶PnUGT50和糖基转移酶PnUGT31进行酵母密码子优化，分别在组合型启动子和G418抗性标签的作用下，插入ZW04BY酵母基因组的δ序列多拷贝位点，获得生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌。本发明通过在起始菌株ZW04BY酿酒酵母中异源过表达人参皂苷Rg3通路合成的2个关键酶实现了人参皂苷Rg3在酿酒酵母中的生产，使其产量达到254.07±56.49mg/L，本发明的方法为人工细胞高效合成人参皂苷Rg3奠定了基础。