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公开(公告)号：CN118460584A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410433277.7
申请日：2024-04-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9系统的营养缺陷型乳酸菌基因编辑系统及应用，所述的营养缺陷型乳酸菌基因编辑系统包括以pLCNICK为骨架构建得到的基因编辑质粒，所述的基因编辑质粒中含有识别特异性靶序列的sgRNAs以及所要插入或敲除位点的上下游同源序列，其连接顺序为上游同源序列‑下游同源序列‑sgRNAs。所述的系统用于外源基因插入时，还包括在上、下游同源序列中间插入外源基因序列。本发明利用CRISPR‑Cas9系统和营养缺陷型选择标记建立了一套在乳酸菌基因组任意位点进行插入、缺失或突变操作的基因组编辑系统，实现了对不同乳酸菌菌株的不同基因位点高效、精确敲除及插入，实现了乳酸菌系统复制的人工控制。
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公开(公告)号：CN110734879B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN201911107985.7
申请日：2019-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N1/20 , A23K10/18 , A23K50/30 , A61K35/747 , A61P1/00 , A61P37/04 , A61P31/14 , A61P31/04 , C12R1/225
Abstract: 本发明提供了一株罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR‑CO21及其应用，涉及益生菌技术领域。该罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR‑CO21，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC No.M 2019601。该罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR‑CO21在肠道内定植性能好，黏附性好，定植后能有效抑制TGEV感染，提高仔猪抵抗病毒侵染、抵抗细菌感染的能力和免疫力。此外，本发明还提供了罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR‑CO21株在提高仔猪抗传染病能力中应用的方法。
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公开(公告)号：CN114518447A
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202210067681.8
申请日：2022-01-20
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/52 , G01N33/543 , G01N33/558 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种检测牛细小病毒的信号增强型胶体金免疫层析试纸条及其应用。所述的试纸条按照连接顺序依次包括样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水垫及位于下方的作为组装平台使用的PVC底板，所述的胶体金垫上吸附有胶体金和辣根过氧化物酶共同标记的抗牛细小病毒单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上具有兔抗牛细小病毒多克隆抗体包被的检测线，以及山羊抗鼠IgG包被的质控线，样品垫提供了待测样品加入的位置；其中，所述的抗牛细小病毒单克隆抗体由分泌牛细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌产生，所述的分泌牛细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为8C10，菌种保藏编号为：CGMCC NO.23880。本发明的提出为牛细小病毒的检测提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN108060269B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201810054827.9
申请日：2018-01-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40℃‑65℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN107082802B
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201710116956.1
申请日：2017-03-01
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用。本发明采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为160NH161。实验证明，160NH161与4A‑1G7上清、腹水均发生特异性反应并且160NH161与1‑24型BTV阳性标准血清反应特异性良好。本发明的提出，对于4型BTV的临床诊断提供了新的技术手段，也为后续建立BTV的型特异性鉴别诊断方法以及4型BTV相关表位疫苗的制备奠定了物质基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106749557B
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201611112486.3
申请日：2016-12-06
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/14 , C12N15/46 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽及其应用。本发明使用前期制备的蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体3H7细胞株，利用噬菌体展示肽技术对3H7细胞株识别的抗原表位进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM。进一步合成短肽利用间接ELISA对3H7细胞株进行鉴定，实验结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM；氨基酸序列比对显示该表位在不同来源的25型蓝舌病病毒毒株间保守。本发明鉴定了蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽，为建立针对蓝舌病病毒的竞争ELISA方法奠定了基础，鉴定出的抗原表位也可应用于今后疫苗设计中，对于我国蓝舌病的防治具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN110423845A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201910537825.X
申请日：2019-06-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于检测牛轮状病毒(BRV)、牛细小病毒(BPV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的多重纳米PCR引物组及其应用。所述的引物组中含有分别用于检测牛轮状病毒、牛细小病毒和牛病毒性腹泻病毒的DPO引物对。本发明将DPO引物结合纳米PCR技术建立了一种能够同时检测BRV、BPV和BVDV的多重DPO-nanoPCR检测方法。与常规PCR方法比较，该方法省时省力，能够迅速、准确、特异地检测出病原，在保证特异的基础上，又具有高度的灵敏性。本发明的提出为BRV、BPV和BVDV早期感染和隐性感染的诊断提供了一种新方法，为BRV、BPV和BVDV临床混合感染的检测提供给了一种可靠的技术手段，为疫病排查、筛查净化及综合防制提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN109722406A
公开(公告)日：2019-05-07
申请号：CN201811392540.3
申请日：2018-11-21
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种表达牛乳铁蛋白肽的胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因缺陷型重组干酪乳杆菌及其构建方法和应用，所述的重组干酪乳杆菌是通过以胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因(thyA)为插入替换位点，插入牛乳铁蛋白肽的表达盒后得到。本发明构建获得的表达牛乳铁蛋白肽的胸腺嘧啶核苷酸合成酶缺陷型重组干酪乳杆菌没有抗生素选择标记，携带有组成型表达牛乳铁蛋白肽LFcinB和LFampin的基因表达盒，并且可利用胸腺嘧啶控制其生长，整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达，并且具有一定的抑菌活性，是真正符合生物安全标准的食品级微生物。本发明的提出为具有益生菌和抗菌肽共有特性的表达牛乳铁蛋白肽的重组干酪乳杆菌菌株进一步应用于生产实践提供了物质基础。
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公开(公告)号：CN109568334A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811346974.X
申请日：2018-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: A61K31/7105 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了lncRNA loc107051710在抑制传染性法氏囊病病毒复制中的用途。所述的lncRNA loc107051710的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用转录组测序技术并且结合生物信息学的分析方法，筛选出48条差异表达的lncRNA，初步鉴定出一条具有抑制IBDV复制功能的宿主体内lncRNA loc107051710，进一步探究发现IBDV感染后，能够引起loc107051710由细胞核转移至细胞质中，通过直接增加IRF8的表达进而间接上调I型干扰素IFNα/β的产生，由此实现抑制IBDV复制的功能。本发明提出了一种具有抑制IBDV复制功能的宿主lncRNA，对于防治传染性法氏囊病具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108148814A
公开(公告)日：2018-06-12
申请号：CN201711353547.X
申请日：2017-12-15
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
CPC classification number: C07K16/10 , C07K2317/33 , C07K2317/35 , G01N33/543 , G01N33/56983 , G01N2469/10
Abstract: 本发明公开了一种用于检测牛轮状病毒的双抗体夹心ELISA诊断试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由菌种保藏编号为CGMCC NO.14726的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体4D10。此外，本发明以纯化的兔抗BRV多抗为捕获抗体，以4D10单抗为检测抗体，建立了BRV双抗体夹心ELISA方法。敏感性实验表明，该方法对BRV的最低检出量为9.884×104TCID50/mL；特异性实验结果表明，该方法具有良好的特异性，与PoRV、PEDV、BPV及TGEV均无交叉反应；批间和批内重复性实验结果显示，该方法具有良好的重复性。使用建立的双抗体夹心ELISA方法对95份临床样品进行检测，与RT-PCR方法相比，符合率为100％。可见本发明建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可用于BRV的快速检测。
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