一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法

    公开(公告)号:CN113046403A

    公开(公告)日:2021-06-29

    申请号:CN202011069179.8

    申请日:2020-09-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法,属于生物工程技术领域。通过微生物重组表达人工构建PAPS合成双功能酶,实现了PAPS的高效率生产。在此基础上,耦联了谷氨酸棒杆菌和结核分枝杆菌来源的聚磷酸激酶的ATP再生系统,可同时回收两种副产物焦磷酸和ADP,实现底物与产物的等量转化,催化体系中生成的PAPS具有较高的纯度,能实现大部分磺酸转移反应中磺酸基团的供给。

    一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法

    公开(公告)号:CN110055201B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201910164544.4

    申请日:2019-03-05

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法,属于生物工程技术领域。本发明选择yoyJ‑yoyA、lytH、lytD、lytG、lytC作为整合位点,将途径基因glmM、glmS、glmU、tuaD和水蛭来源的透明质酸水解酶基因H6LHyal整合到枯草芽孢杆菌基因组中,不仅提高了透明质酸寡糖的产量,还提高了生物量、有利于后期进行透明质酸寡糖的分离纯化。在3L发酵罐发酵40h时透明质酸寡糖的产量达36.04g/L。其3L发酵罐水平的透明质酸平均分子量HA Mw约为3.3×104Da。本发明为微生物系统高效发酵制备透明质酸寡糖奠定了基础,适合于工业化生产应用。

    发酵生产硫酸软骨素的酵母工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN112708569A

    公开(公告)日:2021-04-27

    申请号:CN201911019170.3

    申请日:2019-10-24

    Abstract: 本发明公开了发酵生产硫酸软骨素的酵母工程菌及其应用,属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段,以毕赤酵母GS115和酿酒酵母S.cerevisiae CEN.PK2‑1C为出发菌株,在细胞内异源表达了硫酸软骨素合成途径相关基因:来自大肠杆菌K4的基因kfoC,kfoA,来自小鼠的软骨素硫酸转移酶基因C4ST,C6ST,来自枯草芽孢杆菌的UDP‑葡萄糖脱氢酶基因tuaD,来自酿酒酵母的ATP硫酸化酶基因MET13,得到合成硫酸软骨素A(CSA)、硫酸软骨素C(CSC)和硫酸软骨素E(CSE)的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同构型的硫酸软骨素。

    一种高效分离制备单一分子量透明质酸寡糖的方法

    公开(公告)号:CN106399428B

    公开(公告)日:2019-08-06

    申请号:CN201610865128.3

    申请日:2016-09-29

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高效分离制备单一分子量透明质酸寡糖的方法,属于生物工程技术领域。本发明采用生物酶法催化降解HA,将制备的寡糖规模化分离和纯化,实现了工业化生产制备单一分子量的透明质酸寡糖。本发明将单一分子量的透明质酸寡聚糖进行分离,在工业上用于制备单一寡聚透明质酸及其衍生体具有潜在而非常广泛的价值。

    一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法

    公开(公告)号:CN110055201A

    公开(公告)日:2019-07-26

    申请号:CN201910164544.4

    申请日:2019-03-05

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法,属于生物工程技术领域。本发明选择yoyJ-yoyA、lytH、lytD、lytG、lytC作为整合位点,将途径基因glmM、glmS、glmU、tuaD和水蛭来源的透明质酸水解酶基因H6LHyal整合到枯草芽孢杆菌基因组中,不仅提高了透明质酸寡糖的产量,还提高了生物量、有利于后期进行透明质酸寡糖的分离纯化。在3L发酵罐发酵40h时透明质酸寡糖的产量达36.04g/L。其3L发酵罐水平的透明质酸平均分子量HA Mw约为3.3×104Da。本发明为微生物系统高效发酵制备透明质酸寡糖奠定了基础,适合于工业化生产应用。

    一种双功能酸性脲酶基因及其表达与应用

    公开(公告)号:CN105950596B

    公开(公告)日:2019-06-21

    申请号:CN201610439700.X

    申请日:2016-06-20

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种双功能酸性脲酶基因及其表达与应用,属于生物工程技术领域。本发明的双功能酸性脲酶是来自于普罗威登斯菌(Providencia sp.LBBE),基因排列顺序为D、A、B、C、E、F、G,能够耐受高浓度乙醇的同时高效降解氨基甲酸乙酯和尿素。本发明利用大肠杆菌表达系统BL21(DE3)/pRSFDuet‑1,成功实现了具有双功能酸性脲酶基因的高效表达,以EC为底物时酶活达到0.39U/ml,以尿素为底物时酶活达到4.82U/ml。重组酶在20%的乙醇中37℃保留4h,以EC为底物时仍可保留其93%以上的活性。本发明所发现的双功能酸性脲酶是一种新的脲酶,所制备的重组酶为实现黄酒中EC及尿素的消除,实现EC水解酶工业化生产奠定了基础,具有巨大的经济及社会效益。

    一种双酶法制备可溶性的酵母葡聚糖寡糖的方法

    公开(公告)号:CN109852647A

    公开(公告)日:2019-06-07

    申请号:CN201910202549.1

    申请日:2019-03-18

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 康振 堵国成 周星

    Abstract: 本发明公开了一种双酶法制备可溶性的酵母葡聚糖寡糖的方法,属于生物医药领域。本发明制备可溶酵母葡聚糖寡糖以提取的水不溶性的酿酒酵母葡聚糖为底物,经微生物细胞异源表达的β-1,3-葡聚糖水解酶和β-1,6-葡聚糖水解酶催化形成具有生物活性的水溶性的小分子酵母葡聚糖寡糖。本发明为具有生物活性的可溶酵母葡聚糖的工业化生产方式提供了新的途径。

    一种稳定期自裂解的枯草芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN106244613B

    公开(公告)日:2019-05-17

    申请号:CN201610726181.5

    申请日:2016-08-25

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种稳定期自裂解的枯草芽孢杆菌及其应用,属于基因工程领域。本发明的表达宿主是一种进入稳定期后菌体就自降解的枯草芽孢杆菌。该枯草芽孢杆菌在培养至进入稳定期以后,能够促进细胞裂解的蛋白分子就会在稳定期启动子的促进下过量表达,从而使宿主快速裂解,达到释放胞内物质的目的。利用本发明表达宿主表达了绿色荧光蛋白基因(gfp),通过发酵培养,与利用传统的枯草芽孢杆菌标的宿主相比,最终的菌体浓度降低至少63.2%,而胞外荧光蛋白含量提高至少78.8%~141.5%。

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