一种高效定向无缝DNA片段连接方法

    公开(公告)号:CN102787114A

    公开(公告)日:2012-11-21

    申请号:CN201210284031.5

    申请日:2012-08-11

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,具体为一种定向无缝DNA片段连接方法。本发明的连接引物两端要与待连接DNA片段2a和3a的待连接处两侧各有5-40个碱基的序列完全互补;由于引物的tm值随着碱基数量和GC含量的增加变高,而完成连接反应的TaqDNA连接酶活性的温度区间在65℃~50℃之间,所以连接引物1与单个待连接片段之间的互补碱基数量应使连接引物与单个待连接片段之间的tm值处于50℃~65℃之间;将片段先行磷酸化,或者将引物磷酸化,然后进行PCR扩增,以保证待连接片段的5’端带有磷酸基团。本发明的连接过程中不发生顺序错位,不产生串联寡聚体,不产生载体和片段的自连环化,操作自由度高,操作简单,周期短,价格低廉。

    一种胰岛细胞体外增殖方法

    公开(公告)号:CN101054571A

    公开(公告)日:2007-10-17

    申请号:CN200710038631.2

    申请日:2007-03-29

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 李戈 卢大儒

    Abstract: 本发明属于细胞培养技术领域,具体为一种胰岛细胞体外增殖方法。本发明采用重组碱性成纤维细胞生长因子处理体外培养的胰岛细胞,使其大量增殖,传代可达20代以上,增殖时间超过两个月,并在一定的时间内保留胰岛内分泌的特征。经碱性成纤维细胞生长因子刺激的胰岛细胞经肝门静脉移植给链脲霉素诱导的糖尿病大鼠肝中,糖尿病症状在一周内完全恢复。在未经任何免疫抑止剂处理的情况下,接受移植的糖尿病大鼠在超过两个月的时间内血糖维持正常水平,体重逐渐上升,同时移植后二十天糖耐量实验证明移植大鼠对葡萄糖的响应得到明显的改善。依本发明所述方案增殖的胰岛细胞在植入糖尿病模型动物后,一方面在肝脏内表达胰岛素,另一方面具有明显促进胰岛再生的功能,并上述两方面达到治疗糖尿病的目的。

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